[发明专利]一种溶酶体内酸性水解酶活性的检测方法和检测试剂盒

摘要

本发明属于生化分析检测技术领域，具体为溶酶体内酸性水解酶活性的检测方法和检测试剂盒。本发明首先设计包含5种溶酶体内粘多糖酸性水解酶的检测系统，这五种酶分别为α‑L‑艾杜糖苷酶、艾杜糖醛酸硫酸酯酶、β‑N‑乙酰半乳糖胺‑6‑硫酸酯酶、β‑半乳糖苷酶和芳基硫酸酯酶B酶。本发明利用4甲基伞形酮具有荧光的特性，使用化学合成获得的4甲基伞形酮基团与酶底物结合产生的新底物，采用含有新底物的酸性缓冲溶液与粘多糖水解酶进行反应，水解酶水解底物后释放出游离的4甲基伞形酮荧光物质。样本中水解酶的活性越高，水解底物释放的4甲基伞形酮的量越多，通过荧光检测产生的荧光强度也越高，从而实现对水解酶活性的定量检测。本发明检测灵敏度高、选择性好、抗干扰能力强、可重现性好、操作简便。

主权项

一种溶酶体内酸性水解酶活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将含有4甲基伞形酮荧光基团的底物溶液与待测水解酶溶液孵育，水解酶水解底物释放出荧光基团；对于硫酸酯酶，将其水解有机硫酸酯底物使之游离出无机硫酸后形成一个新的不含硫酸基团的底物化合物，该底物用另一种水解酶水解，通过添加一定量的水解酶，水解新形成的底物，释放荧光基团；测定反应在355nm处激发光下460nm出的发射光强度；根据荧光强度与荧光物质浓度的标准曲线关系，计算得到荧光物质浓度，通过荧光物质浓度与酶活性之间的标准曲线关系，计算得到待测水解酶溶液中水解酶的活性。