[发明专利]一种表达重组人NLK基因的质粒及构建方法在审
| 申请号： | 201710804329.7 | 申请日： | 2017-09-08 |
| 公开（公告）号： | CN107828814A | 公开（公告）日： | 2018-03-23 |
| 发明（设计）人： | 宋鑫;付桥粉;孟旭东;李乔林;田慧 | 申请（专利权）人： | 信雅生物科技（苏州）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/66;C12N15/54;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海宣宜专利代理事务所(普通合伙)31288 | 代理人： | 刘君 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明的目的在于针对NLK基因在肿瘤中的研究现状及其可作为潜在治疗靶点的应用前景，提供一种表达重组人NLK基因的质粒及构建方法，其通过设计能特异性克隆人NLK基因的引物并在其上游添加限制性内切酶识别序列及保护性碱基；用PCR反应合成该含有限制性内切酶识别序列及保护性碱基的人NLK基因序列；将含有限制性内切酶识别序列的人NLK基因序列与pcDNA3.0载体分别进行双酶切反应；用T4 DNA连接酶将双酶切后的人NLK基因序列与双酶切后的pcDNA3.0载体进行连接，形成重组质粒；将重组质粒进行感受态细胞转化、培养、筛选和测序验证，挑选出正确克隆的重组菌液；提取正确克隆的重组菌液中的质粒；用Western blot验证上一步中重组质粒于细胞内NLK蛋白的表达情况。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 重组 nlk 基因 质粒 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种表达重组人NLK基因的质粒的构建方法，其包括如下步骤：S1，设计能特异性克隆人NLK基因的引物并在其上游添加限制性内切酶识别序列及保护性碱基，化学合成该引物；S2，用PCR反应合成S1中含有限制性内切酶识别序列及保护性碱基的人NLK基因序列；S3，将纯化后的含有限制性内切酶识别序列及保护性碱基的人NLK基因序列与pcDNA3.0载体分别进行双酶切反应；S4，用T4DNA连接酶将双酶切后的人NLK基因序列与双酶切后的pcDNA3.0载体进行连接，形成重组质粒；S5，将重组质粒进行感受态细胞转化、培养、筛选和验证，挑选出正确克隆的重组菌液；S6，提取正确克隆的重组菌液中的质粒；S7，用Western blot验证上一步中重组质粒于细胞内NLK蛋白的表达情况。
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