[发明专利]哺乳动物体细胞克隆方法和使用的培养液

摘要

本发明公开了一种哺乳动物例如牛或犬或羊的体细胞克隆方法和使用的培养液。其中哺乳动物体细胞克隆的方法包括以下处理哺乳动物体细胞克隆胚的步骤：1)将待移植的哺乳动物体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合后1h，挑选成功融合的哺乳动物体细胞克隆胚进行激活处理；2)哺乳动物体细胞克隆胚在进行激活处理后，转移到G1.3培养液中进行培养。还涉及上述方法中使用的培养液。本发明方法呈现如说明书所述优异技术效果。

主权项

1.一种哺乳动物体细胞克隆的方法，该方法包括以下处理哺乳动物体细胞克隆胚的步骤：1)将待移植的哺乳动物体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合后1h，挑选成功融合的哺乳动物体细胞克隆胚进行以下激活处理：首先在含5μmol/L离子霉素的mSOF溶液中室温孵育4min，然后在含2mmol/L的6‑DMAP和1μmol/L的Oxamflatin的mSOF溶液中，在38.5℃、5%CO₂、饱和湿度条件下培养4h；2)哺乳动物体细胞克隆胚在进行激活处理后，转移到含0.5~1.5μmol/L的Oxamflatin的G1.3培养液中，在38.5℃、5%CO₂、饱和湿度条件下培养4~12h，再用G1.3培养液清洗多次，继续在G1.3培养液中培养至72h；然后将哺乳动物体细胞克隆胚转移到G2.3培养液中继续在38.5℃、5%CO₂、饱和湿度条件下培养至第7d；其中：所述哺乳动物选自牛、羊、犬、马、猪；所述哺乳动物体细胞克隆胚是通过基于体细胞核移植构建的；所述mSOF溶液是以SOF培养液作为基础培养基，还包含有体积分数2%的BME、体积分数1%的MEM、体积分数1%的ITS、1mmol/L的谷氨酰胺、80mg/mL的BSA、100IU/mL的青霉素和0.1mg/mL的链霉素；步骤1)中进行激活处理时，所用的mSOF溶液中与Oxamflatin一起还增补添加了相对于Oxamflatin而言4摩尔倍量的甘油，并且还增补添加了相对于Oxamflatin而言2摩尔倍量的蔗糖；步骤2)中进行培养时，所用的G1.3培养液中与Oxamflatin一起还增补添加了相对于Oxamflatin而言4摩尔倍量的甘油，并且还增补添加了相对于Oxamflatin而言2摩尔倍量的蔗糖。