[发明专利]橡胶树胚性愈伤组织的低温保存培养基及其低温保存方法

摘要

本发明提供了一种橡胶树胚性愈伤组织的低温保存培养基及其低温方法，属于组织培养技术领域。所述低温保存培养基通过添加外源抗氧化剂L‑谷氨酰胺、抗氧化型维生素VC以及外源激素水杨酸；激发内源抗氧化酶谷胱甘肽还原酶GR作用以维持细胞内高比例的GSH/GSSG以及GR参与植物体内清除ROS关键途径抗坏血酸谷胱甘肽循环AsA‑GSH，辅以其他抗氧化酶，协同有效清除低温保存下的胚性愈伤组织内多余的ROS，以提高胚性愈伤组织抗低温胁迫能力。经低温保存培养基保存的胚性愈伤组织的愈伤组织存活率与对照25±2℃暗培养条件下的胚性愈伤组织相比无显著差异，且FDA荧光检测表明经低温保存的胚性愈伤组织细胞活力维持更强。

主权项

1.一种橡胶树胚性愈伤组织的低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：将胚性愈伤组织接种到橡胶树胚性愈伤组织的低温保存培养基上，在3～8℃条件下保存；/n所述橡胶树胚性愈伤组织的低温保存培养基，以改良MS为基本培养基，包括以下含量组分：L-谷氨酰胺250～350mg/L、维生素C 0.3～0.8mg/L、水杨酸18～23mg/L、水解酪蛋白280～320mg/L、椰子汁体积浓度8％～12％、蔗糖65～75g/L、活性炭质量浓度0.08％～0.12％和植物凝胶2.0～2.5g/L；/n所述改良MS培养基以水为溶剂，包括硝酸铵1100mg/L、硝酸钾1267mg/L、二水氯化钙800mg/L、七水硫酸镁247mg/L、磷酸二氢钾226mg/L、碘化钾0.83mg/L、硼酸9mg/L、四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸1mg/L、盐酸硫胺素VB 15.0mg/L、盐酸吡哆醇VB 6 1.0mg/L、烟酸1mg/L和生物素VH0.05mg/L；/n所述低温保存培养基的pH值为5.6～6.0。/n