[发明专利]一种提高多引物RCA特异性的方法在审
| 申请号： | 201710811315.8 | 申请日： | 2017-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN107686860A | 公开（公告）日： | 2018-02-13 |
| 发明（设计）人： | 张云威;戚智青;刁勇 | 申请（专利权）人： | 华侨大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 泉州市文华专利代理有限公司35205 | 代理人： | 张浠娟 |
| 地址： | 362300 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高多引物RCA特异性的方法，其通过改良商品化多引物RCA试剂盒TempliPhi(Amersham Biosciences)中的各成分含量，替换成市面上容易购买并且价格低廉的2.5mMdNTP，10×BSA，phi29DNA聚合酶buffer。同时在多引物RCA反应过程中加入适当浓度的聚乙二醇(PEG，8000)，可以显著地提高多引物RCA的特异性，填补多引物RCA反应中一直以来难以消减的非特异性扩增产生的拖尾现象。实现了对市售多引物RCA试剂盒的显著优化。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 引物 rca 特异性 方法 | ||
【主权项】：
一种提高多引物RCA特异性的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)配置浓度为0.1mg/ml的PEG8000溶液，备用；(2)变性：以pUC19‑hupB重组质粒DNA作为模板，在5ul ddH2O中加入1ng pUC19‑hupB重组质粒DNA，混匀后，95℃加热3min，然后冷却至室温或4℃，获得变性样品液；(3)培育：将2ul的2.5mM dNTP，2ul的10×BSA，1ul的phi29DNA聚合酶buffer，以及0.2ul的TempliPhiTMDNA测序模板扩增试剂盒中的Phi29DNA酶混合液，混匀，置于冰上，得到预混合酶液；将5ul预混合酶液加入所述变性样品液中，混匀，得到多引物RCA反应液；在此多引物RCA反应液中加入0～1.6ul的所述PEG8000溶液，然后于30℃下水浴4‑18h；65℃加热10min，冷却至4℃，得到改良的多引物RCA扩增产物。
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