[发明专利]红雪茶抗肿瘤活性部位及其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种红雪茶抗肿瘤活性部位及其制备方法与应用，属于植物药物技术领域。本发明红雪茶抗肿瘤活性部位是采用地衣红雪茶为原料，结合抗肿瘤活性检测，制备而成的具有显著性抗肿瘤作用的多个混合物；具有明显的细胞靶向性、选择性抗肿瘤作用，与临床抗肿瘤化疗药物具有协同或相加抗肿瘤作用，能显著性促进肿瘤细胞凋亡、影响肿瘤细胞的周期分布、抑制肿瘤细胞增殖。不同活性部位的抗肿瘤作用存在较大差异。红雪茶抗肿瘤活性部位可制成各种制剂使用，可作为抗肿瘤药物、联合抗肿瘤药物、辅助抗肿瘤保健品，具有良好的应用前景。

主权项

红雪茶抗肿瘤活性部位的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），将地衣红雪茶干燥后粉碎，以体积浓度为60%‑70%乙醇为提取溶剂，提取多次；地衣红雪茶与每次所用的提取溶剂的料液比为1g:4‑5ml；合并提取液浓缩至膏状，得到初级提取物；步骤（2），将初级提取物与蒸馏水按质量比为1‑2:1混合成混悬状，然后向其中加入体积浓度为95%‑100%的乙醇，得到混合液；其中，乙醇的加入量为使所得的混合液中乙醇的体积浓度大于80%；之后对混合液振摇进行醇沉，振摇至混合均匀后，静置20‑24小时，离心，取上层液体；余下沉淀物再采用体积浓度为80%的乙醇多次醇沉，离心取上层液体，每次醇沉所用的体积浓度为80%的乙醇的体积是沉淀物体积2‑3倍体积；合并所有上层液体，浓缩至膏状，得到活性部位A；步骤（3），将活性部位A与蒸馏水按质量比为1‑2:1混合成混悬状，得到混悬液；之后在搅拌振摇条件下，向混悬液中加入体积是混悬液体积3‑4倍的氯仿，待混合均匀后，静置分层，取氯仿萃取液层，水相层离心分离氯仿萃取液；水相层再用氯仿反复萃取、离心3‑4次，每次萃取所用氯仿的体积为被提萃取的水相层体积的2‑3倍，合并所有氯仿萃取液，浓缩至膏状，得到活性部位D；步骤（4），将活性部位D用体积为活性部位D体积3‑4倍的乙醚搅拌溶解成混悬状后，静置1‑2小时，离心，取乙醚上清液；余下沉淀物继续以乙醚提取3‑4次，每次提取所用乙醚的体积为沉淀物体积的2‑3倍，合并乙醚上清液及所有乙醚提取液，浓缩至膏状，得到活性部位K；步骤（5），将活性部位D采用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱溶剂依次为石油醚、体积比为2:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂、氯仿、体积比为100:1的氯仿和甲醇的混合溶剂、体积比为20:1的氯仿和甲醇的混合溶剂、体积比为10:1的氯仿和甲醇的混合溶剂、体积比为5:1的氯仿和甲醇的混合溶剂、甲醇进行梯度洗脱，除首次所用石油醚体积为所用硅胶柱体积的3‑4倍外，其余每种洗脱溶剂所用的体积均为所用硅胶柱体积的2‑3倍，TLC跟踪，合并相同部分，并浓缩除去溶剂；之后对浓缩物顺序编号，并进行体外抗肿瘤作用活性检测，将对癌细胞生长抑制率大于60%的编号相连浓缩物合并为一个有效活性部位，得到活性部位E、活性部位H和活性部位L’；步骤（6），对活性部位L’采用体积为活性部位L’ 3‑4倍的乙酸乙酯溶解成混悬状态后，离心，取上清液；余下沉淀物继续以乙酸乙酯提取3‑4次，每次提取所用乙酸乙酯的体积为沉淀物体积的2‑3倍，合并上清液及所有乙酸乙酯提取液，浓缩成膏状，得到活性部位L；步骤（7），将活性部位E、H和L活性部位合并，再以氯仿为萃取溶剂进行萃取，每次萃取所用氯仿的体积为被萃取物体积的3‑4倍，萃取3‑4次，分离氯仿萃取液，之后合并所有氯仿萃取液，浓缩并干燥，得到活性部位T。