[发明专利]一种制作空心菜根结巨型细胞石蜡切片的方法

摘要

本发明公开了一种制作空心菜根结巨型细胞石蜡切片的方法，该方法在常规石蜡切片技术上，对染色、横切切片角度和脱蜡等步骤进行了改进。采用爱利氏苏木精染液进行植物组织的染色，将传统的脱蜡后染色改为脱蜡前整体染色。切片角度采用横切，切片厚度为5‑10μm。本发明还改进了脱蜡方式，采用TO型生物制片透明剂代替二甲苯进行脱蜡。本发明空心菜根结巨型细胞石蜡切片的制作方法，明显提高了空心菜根结石蜡切片的染色效果，提高工作效率，保证了空心菜巨型细胞石蜡切片的效果。

主权项

一种制作空心菜根结巨型细胞石蜡切片的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)抽真空和固定将空心菜根结切成0.5‑1cm的小段材料；把FAA固定液和材料放入注射器，推动抽筒排尽空气，然后手指按住针头插孔，另一只手推拔抽筒若干次，将材料内的空气抽出；然后材料置于FAA固定液中固定24h以上，至材料下沉为止；(2)染色将材料清洗干净，置于2％丙酸溶液中浸泡48h以上，然后转移至爱利氏苏木精染液中浸泡4d以上，最后将材料洗净；(3)脱水将材料置于体积浓度由低到高的若干乙醇溶液中逐级脱水1.5h以上，然后在无水乙醇中脱水1h以上，并重复一次上述操作；(4)5级氯仿透明将材料放入标有等距5分格标记的瓶中，并加入无水乙醇至5格处，透明处理0.5h以上；然后逐级换入氯仿，即每次吸出1格溶液，加入1格氯仿，透明处理0.5h以上；最后一级全部吸出，再加入氯仿至2.5格处；若材料放入乙醇氯仿后溶液出现浑浊，则表示材料脱水不彻底，应重新脱水；(5)浸蜡标有等距5分格标记的瓶中余下的一半位置分多次加入石蜡，每次加蜡相隔1h以上，然后将瓶移至38‑40℃恒温培养浸蜡2d以上；接着将材料移入浸蜡盒中，加入50％体积的纯蜡和50％体积的二甲苯，40‑42℃恒温培养45min以上；再换入75％体积的纯蜡和25％体积的二甲苯，46‑48℃恒温培养45min以上；最后换入纯蜡54‑58℃恒温培养3h以上，期间换蜡两次以上；(6)包埋将包埋机中的纯蜡熔化后倒入包埋模具内，将材料从浸蜡盒中取出放在包埋模具中央的蜡液里，各个材料之间保持距离，然后将包埋模具移至4℃冷冻台上使其迅速冷却凝固，最后卸下蜡块；(7)蜡块修整将蜡块修整成长方形六面体，接着用温热的金属小蜡铲将蜡块底部固着在台木正中，在蜡块基部的周围再添加石蜡，用小刀将材料前后左右1‑2mm以外的蜡修去；(8)切片将修好的蜡块及台木固定在切片机上，材料的切面与切片刀口及空心菜根结中柱线三者平行，切片角度采用横切，切片厚度为5‑10μm；切出的切片用毛笔或镊子轻轻挑起放置，以备贴片；(9)贴片贴片前在载玻片上涂抹明胶黏贴剂，然后将切下的蜡带放入温度为38‑40℃的恒温水浴锅中展片，再将蜡带引至载玻片上，使蜡带光滑的一面紧贴载玻片；(10)拷片、脱蜡和封片将贴好的片子烘干，然后将片子放入装有TO型生物制片透明剂的染缸中脱蜡10min以上，换掉透明剂后再浸泡10min以上，重复若干次；晾干后，取中性树胶滴在材料上，再将盖玻片倾斜放下封片，制得空心菜根结巨型细胞石蜡切片。