[发明专利]一种去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽的方法

摘要

本发明公开了一种去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽的方法。该方法包括下述步骤：1)降温：将小牛血清去蛋白提取液的温度降低到到‑7±0.5℃；2)向降温后的小牛血清去蛋白提取液中加入总质量0.2％‑0.25％的ZnS粉末，并搅拌均匀；3)速冻：将步骤2)得到的混合物放入‑40℃—‑45℃环境中速冻4‑4.5小时；4)退火：将步骤3)速冻后的混合物放入‑23℃的环境中静置6‑7小时；5)复融：将步骤4)退火后的混合物置于室温中，自然融化；6)过滤：将融化后的混合物过滤，除掉ZnS粉末，即可。本发明在不降低小牛血清去蛋白提取物的活性和疗效的基础上，特异性地去除小牛血清去蛋白提取物中的糖肽，降低产品诱发四型变态反应的几率。

主权项

1.一种去除小牛血清去蛋白提取物中糖肽的方法，包括下述步骤：/n1)降温：将小牛血清去蛋白提取液的温度降低到到-7±0.5℃；/n2)向降温后的小牛血清去蛋白提取液中加入总质量0.2％-0.25％的ZnS粉末，并搅拌均匀；/n3)速冻：将步骤2)得到的混合物放入-40℃至-45环境中速冻4-4.5小时；/n4)退火：将步骤3)速冻后的混合物放入-23℃的环境中静置6-7小时；/n5)复融：将步骤4)退火后的混合物置于室温中，自然融化；/n6)过滤：将融化后的混合物过滤，除掉ZnS粉末，即可；/n所述小牛血清去蛋白提取液的制备方法，包括如下步骤：/n1)向小牛血清中加入活性炭，进行活性炭吸附，得到除杂后的混合液；所述小牛血清为出生1-6个月的新生小牛采血分离得到的；所述活性炭的加入量为所述小牛血清质量的1.8％-2.2％；所述活性炭吸附的时间为20-30min；/n2)将所述混合液和乙醇混合进行醇沉除杂，收集回收液；所述混合液和所述乙醇的体积比为1：(3.4-3.6)；所述醇沉除杂的时间为1.8-2.2h；所述乙醇是以乙醇水溶液的形式存在，所述乙醇水溶液的体积分数为96％；还包括对醇沉除杂后所得液进行离心，弃去沉淀物，收集上清液，并对所述上清液减压蒸馏除去乙醇的步骤；所述离心为在3000r/min离心20分钟；/n3)将所述回收液和复合蛋白酶混合进行酶解，得到酶解液；所述复合蛋白酶的加入量为所述回收液质量的1.8％-2.2％；所述复合蛋白酶是由木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和枯草蛋白酶组成，所述木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和枯草蛋白酶的质量比为1：(0.9-1.1)：(0.55-0.65)；所述木瓜蛋白酶的活力为3500U/mg；所述胰蛋白酶的活力为3000U/mg；所述枯草蛋白酶的活力为4000U/mg；所述酶解的条件为：酶解温度为38-42℃，酶解时间为22-26h，pH值为7.8-8.2；还包括对所述酶解液进行超滤截留的步骤：用5K中空纤维柱进行超滤截留；/n4)将所述酶解液和氧化剂混合进行氧化反应，即得到所述小牛血清去蛋白提取液；所述氧化剂为H₂O₂；所述氧化剂的加入量为所述酶解液质量的0.18％-0.22％；所述氧化反应的反应温度为36.5-37.5℃，反应时间为0.9-1.1h；所述氧化反应时的反应体系的pH值为5.1-5.3；还包括向所述氧化反应后所得物中加入MnO₂除去多余H₂O₂，并且过滤除去过量MnO₂的步骤：向所述氧化反应后所得物中加入过量的MnO₂，在60℃下保温10h，并且用0.22μm微孔滤膜过滤除去过量MnO₂即可；还包括对所述氧化反应后所得物进行病毒灭活和灌封的步骤。/n