[发明专利]一种检测鼻气管鸟杆菌的试剂盒及其制备方法与应用

摘要

本发明涉及生物技术和动物疫病诊断领域，具体公开了一种检测鼻气管鸟杆菌的试剂盒及其制备方法与应用。本发明提取B型鼻气管炎鸟杆菌的脂多糖作为包被抗原，该纯化的抗原对ORT具有很强的特异性、敏感性，可一次性实现对18个血清型ORT的检测，能真实准确地反应鸡群中ORT的抗体水平。本发明使用辣根过氧化物酶标记的兔抗禽IgG作为酶标抗体，可广泛针对禽类，如鸡、鸭和鹅等进行通用性的检测，提高了本试剂盒的通用性。

主权项

1.B型鼻气管炎鸟杆菌脂多糖在制备用于检测多种血清型鼻气管鸟杆菌的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括：包被有鼻气管鸟杆菌脂多糖的固相载体、酶标抗体、鼻气管鸟杆菌阴性对照血清和阳性对照血清；所述鼻气管鸟杆菌脂多糖来自B型鼻气管炎鸟杆菌；所述鼻气管鸟杆菌脂多糖的制备方法为采用脂多糖提取试剂盒提取：(1)将B型鼻气管炎鸟杆菌菌株活化，采用牛肉膏蛋白胨固体培养基划线培养，转接入牛肉膏蛋白胨液体培养基中摇床培养；(2)获取菌体培养物，离心，使用PBS重悬菌体沉淀；(3)向重悬菌体中加入裂解缓冲液，加入氯仿，室温孵育，离心取上清，加入纯化裂解液，混匀孵育，离心，洗涤，干燥后加入Tris‑HCL，即得；所述包被有鼻气管鸟杆菌脂多糖的固相载体的制备方法为：(1)向微孔板的每孔加入含43±5ug/ml B型ORT抗原的包被液，4℃过夜包被10‑16h；(2)每孔加洗涤液进行洗板；(3)向微孔板的每孔加入封闭液进行封闭；(4)将微孔板放入恒温恒湿箱，37℃放置2h；所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的兔抗禽IgG。