[发明专利]一种油料植物白檀组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种油料植物白檀组培快繁方法。该方法如下：外植体选择与预处理→成熟种胚的启动培养→带根无菌苗→取无菌根为外植体→胚性愈伤组织诱导→体细胞胚胎分化及增殖→体细胞胚胎成熟及萌发培养。

主权项

1.一种油料植物白檀组培快繁方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）将白檀种子去除果肉，温水洗净，以确保白檀种子外壳没有油脂，备用；（2）将洗净的白檀种子再用无菌水洗涤后浸泡于体积百分比浓度为75%的酒精溶液中25—35s，用无菌水冲洗后浸泡于体积百分比浓度为0.1%的升汞中8—12min，用无菌水冲洗后去除种皮和胚乳，取出种胚备用；（3）以MS培养基为基本培养基，向基本培养基中加入琼脂粉、白砂糖和萘乙酸，调节pH值为5.8—6.4，得种胚培养基；所述种胚培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，萘乙酸的浓度为0.03—0.07mg/L；将种胚接种至种胚培养基后于20—30℃进行暗培养15—20d，待根系发育完全形成完整植株，则进行散射光培养6—8d，待叶片舒展后转入光照培养，光照12h/d，光照强度为2000LX；至获得无菌苗，将无菌苗的根作为组培快繁的外植体，备用；（4）以MS或改良MS为基本培养基，向基本培养基中加入琼脂粉、白砂糖、6‑苄基氨基嘌呤和2,4‑二氯苯氧乙酸，调节pH值为5.8—6.4，得胚性愈伤组织的诱导培养基；所述诱导培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，6‑苄基氨基嘌呤的浓度为0.1—0.3mg/L，2,4‑二氯苯氧乙酸的浓度为0.1—0.3mg/L；将外植体接种至诱导培养基，于20—26℃进行避光培养15—20d，得胚性愈伤组织；（5）以改良MS为基本培养基，向基本培养基中加入琼脂粉、白砂糖、6‑苄基氨基嘌呤和2,4‑二氯苯氧乙酸，调节pH值为5.8—6.4，得体细胞胚胎分化及增殖培养基；所述体细胞胚胎分化及增殖培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，6‑苄基氨基嘌呤的浓度为0.1—0.25mg/L，2,4‑二氯苯氧乙酸的浓度为0.05—0.2mg/L；将胚性愈伤组织接种至体细胞胚胎分化及增殖培养基，于20—26℃进行避光培养15—25d，得分化后的体细胞胚；（6）以改良MS为基本培养基，向基本培养基中加入琼脂粉、白砂糖和GA₃，调节pH值为5.8—6.4，得体细胞胚胎成熟及萌发培养基；所述体细胞胚胎成熟及萌发培养基中，琼脂粉的质量百分比浓度为0.6—0.7%，白砂糖的质量百分比浓度为2—4%，GA₃的浓度为0.5—2.0mg/L；将分化后的体细胞胚接种至体细胞胚胎成熟及萌发培养基，于20—26℃进行暗培养15—20d；当体细胞胚胎达到成熟的子叶胚的阶段时，转入大量元素减半的改良MS培养基中进行成熟体细胞胚的萌发培养，所述大量元素减半的改良MS培养基中加入白砂糖，白砂糖在大量元素减半的改良MS培养基中的质量百分比浓度为1.3—1.7%；萌发培养前10d采用避光培养，培养温度20—26℃，待根系发育完全，子叶伸展，苗高长至1.5cm时，转入光照培养，培养温度20—26℃，光照12h/d,光照强度为2000LX，培养20—25d。