[发明专利]一种饮用水中隐孢子虫的检测方法及试剂盒在审

专利信息
申请号: 201710884045.3 申请日: 2017-09-26
公开(公告)号: CN107586864A 公开(公告)日: 2018-01-16
发明(设计)人: 李红岩;杨敏;李春格;李罗英;于志勇 申请(专利权)人: 中国科学院生态环境研究中心
主分类号: C12Q1/6893 分类号: C12Q1/6893;C12N15/10
代理公司: 北京风雅颂专利代理有限公司11403 代理人: 张拥
地址: 100085*** 国省代码: 北京;11
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摘要: 发明公开了一种饮用水中隐孢子虫的检测方法及试剂盒,本发明采用盘式过滤器过滤截留饮用水中微生物‑‑丙酮溶解滤膜‑‑磷酸盐沉淀微生物‑‑冻融前处理和蛋白酶破坏卵囊外部结构‑‑离心得到上清液,上清液用于直接提取卵囊DNA,进行qPCR基因定量。采用本发明的检测方法检测饮用水中隐孢子虫无假阳性出现,结果准确可靠,特异性强,而且可以检测到10个SSUrRNA基因拷贝,灵敏度高,检测结果快,实验成本低,采用该检测方法测定的去离子水和地下水源水中隐孢子虫的加标回收率分别达到了55%和46%。
搜索关键词: 一种 饮用 水中 孢子 检测 方法 试剂盒
【主权项】:
一种饮用水中隐孢子虫的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)饮用水的前处理采用过滤器过滤饮用水,过滤器内的滤膜截留饮用水中微生物,然后采用有机溶剂溶解滤膜,待滤膜完全溶解后,加入缓冲液沉淀微生物,离心回收沉淀物;(2)水样DNA提取将沉淀物涡旋后形成悬浮物,加入裂解液进行冻融前处理,冻融前处理完成后加入蛋白酶用于破坏隐孢子虫卵囊外部结构,离心取上清液,上清液用于提取隐孢子虫卵囊DNA;(3)qPCR检测采用qPCR方法对隐孢子虫卵囊DNA进行扩增,根据扩增结果判断饮用水中是否感染了隐孢子虫,并能确定感染量。
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