[发明专利]一种胎盘血造血干细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种胎盘血造血干细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)采集胎盘血，通过0.3‑1.0wt％的氯化钠溶液稀释，0.3‑1.0wt％的甲基纤维素溶液沉淀，再用浓度为12‑16％的人AB血浆重悬和分离液分离纯化，获得单个核细胞；(2)向单个核细胞重悬液中加入CD34⁺抗体孵育，然后加入CD34⁺免疫磁珠孵育，用新洗涤液洗涤后置于磁场中，静置，得CD34⁺细胞；(3)将CD34⁺细胞接种于胎盘血造血干细胞培养基中培养，获得细胞。该培养方法稳定有效，使得造血干细胞能够长久处于增殖不分化状态，避免造血干细胞在增殖过程中分泌大量氧化产物促使细胞凋亡的问题，提高了造血干细胞的扩增率和细胞活性。

主权项

1.一种胎盘血造血干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集胎盘血，加入等体积的稀释液进行稀释，得胎盘血稀释液，接着向胎盘血稀释液中加入质量百分数为4‑8％的沉淀液进行沉淀，然后离心，弃除上清液，得沉淀，向沉淀中加入重悬液，混匀，然后再加入分离液，离心，取云雾层，向云雾层中加入重悬液，混匀，离心，得单个核细胞，向单个核细胞中加入重悬液，得细胞重悬液，细胞重悬液中单个核细胞密度为1‑2×108个/mL；(2)向细胞重悬液中加入CD34+抗体，混匀，室温下孵育10‑20min，然后加入CD34+免疫磁珠，混匀，室温下孵育10‑20min，用新洗涤液洗涤后置于磁场中，静置3‑5min后弃去上清液，得造血干细胞CD34+细胞；其中，CD34+抗体加入量为80‑100μL/mL，CD34+免疫磁珠加入量为40‑60μL/mL细胞重悬液；(3)将造血干细胞CD34+细胞接种于胎盘血造血干细胞培养基中，使造血干细胞CD34+细胞密度为1‑3×105个/mL，置于37℃，5％CO2饱和湿度培养箱中培养5‑7天，收获细胞。