[发明专利]一种浓度梯度rhIL-2依赖的iNKT细胞扩增方法及其应用

摘要

本发明公开了一种浓度梯度rhIL‑2依赖的iNKT细胞扩增方法及其应用。本方法包括(1)提取外周血单个核细胞PBMC；向步骤(1)提取的PBMC细胞中加入终浓度为100ng/mlα‑GalCer培养48小时；向步骤(2)培养细胞中以梯度的方式逐渐增加培养基中rhIL‑2浓度。本发明在培养第21天收获iNKT细胞，iNKT细胞数提高10万倍，其中90％以上为CD4－iNKT细胞，具有上调免疫反应和直接杀瘤作用。本发明的方法激活和扩增的iNKT细胞扩增效率更高，选择性地扩增Th1样iNKT细胞，加强了体外扩增iNKT细胞免疫增强、肿瘤免疫监控和杀伤的功能。

主权项

1.一种浓度梯度rhIL‑2依赖的iNKT细胞扩增方法，其特征在于，培养第0天，加入100ng/mlα‑GalCer；培养第0‑11天，以梯度的方式增加rhIL‑2浓度；固定间隔的时间，rhIL‑2浓度呈等差或等比增加，间隔的时间是1‑72小时，rhIL‑2浓度为10‑400IU/ml；培养第7天加入同一供者诱导培养的成熟DC，DC在加入iNKT细胞之前两小时先加入100ng/mlα‑GalCer进行孵育，培养第14天使用Anti‑iNKT MicroBeads human进行分选，分选得到的iNKT细胞加入OKT3单克隆抗体包被的培养瓶中培养，培养基中加入CD28抗体，rhIL‑15和rhIL‑7：OKT3单克隆抗体浓度为1‑5μg/ml，CD28抗体浓度为1‑5μg/ml，rhIL‑15、rhIL‑7浓度为1‑10ng/ml。