[发明专利]Cr(VI)还原菌的鉴定及其培养方法

摘要

本发明公开了Cr(VI)还原菌的鉴定及其培养方法，本发明采用微生物分离纯化方法，从电镀厂下水管道排污口的含铬土壤中筛选分离Cr(VI)还原菌，选择在150mg/L Cr(VI)溶液中生长，且Cr(VI)去除率可达73％的ZJ‑8作为实验菌株，采用生理生化法和16s rDNA测序法，对ZJ‑8进行鉴定，并分别研究其初始Cr(VI)浓度、pH、温度等对细菌生长和Cr(VI)去除效果的影响。本发明所筛选的ZJ‑8在有较高代谢活动的条件下具有较高的Cr(VI)去除能力，属于革兰氏阴性杆菌，经鉴定为苍白杆菌属Ochrobactrum sp.。ZJ‑8具有较强的去除Cr(VI)的能力，在pH 7‑9、接种量6％(体积分数)及30℃条件下，50mg/L的Cr(VI)在处理72h后，去除率可达89.4％。该细菌有望用于铬污染水体和土壤的修复。

主权项

1.Cr(VI)还原菌的鉴定及其培养方法，其特征在于：其步骤是：(1)培养基的制备细菌培养基(LB)：称取蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，葡萄糖5g，少量乳酸钠，加入1000mL蒸馏水中，用NaOH和HCl调节pH至7.9左右，于115℃灭菌30min，冷却后备用(固体培养基加入20g/L琼脂)。含Cr(VI)培养基：实验中以重铬酸钾(K2Cr2O7)作为Cr(VI)源，在已灭菌的细菌培养基中加入相应浓度的重铬酸钾(将重铬酸钾溶液跟液体培养基分别灭菌，冷却后在超净工作台中将两溶液混合在一起)，调至所需浓度。(2)菌株分离铬还原菌从铬污染土壤中分离。称取10g土壤样品于已灭菌的250mL锥形瓶中，加入50mL灭菌培养基，置于恒温摇床中，30℃、150r·min‑1摇床培养24h，在LB液体培养基中逐步提高含Cr(VI)浓度，增加Cr(VI)还原菌的耐受性，用10倍稀释法将其稀释后涂布在固体培养基上进行菌株的分离筛选和培养。(3)菌株筛选通过测定菌株在不同Cr(VI)浓度下的OD600对每一株分离菌株评估它的最低抑菌浓度来测定它的耐Cr(VI)能力，抑制细菌生长的最低浓度被认为是MIC(Minimum inhibitory concentration)。从样品中分离得到8株菌株能耐受150mg/L、200mg/L Cr(VI)，并且培养液中Cr(VI)去除率可以达到50％以上。(4)菌株鉴定将菌株划线接种于固体培养基，培养2‑3d，通过革兰氏染色法在显微镜下观察菌落形态，并进行生理生化检测。将菌株液体培养24h，离心收集菌体，利用细菌基因组DNA提取试剂盒抽提基因组总DNA。使用16S rDNA通用引物27F：5’‑AGAGTTTGATCCTGGCTCAG‑3’和1492R：5’‑GGTTACCTTGTTACGACGACTT‑3’，直接扩增菌体的16S rDNA片段。PCR扩增产物序列送由北京六合华大基因科技有限公司进行测序。