[发明专利]一种重组高温镍铁氢化酶的异源表达纯化方法及其应用有效
| 申请号： | 201710962173.5 | 申请日： | 2017-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN109666689B | 公开（公告）日： | 2022-11-15 |
| 发明（设计）人： | 张以恒;宋云洪;刘美霞 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N9/02;C12P7/56;C12P19/36;C12P19/32 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 苏宇欢 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开一种重组高温镍铁氢化酶的异源表达纯化方法及其应用，属于镍铁氢化酶的表达纯化及应用领域。本发明所公开的高温镍铁氢化酶来源于极端嗜热厌氧古菌Pyrococcus furiosus，利用穿梭载体在另一极端嗜热厌氧古菌Thermococcus kodakarensis进行重组过表达，通过组氨酸标签与镍柱的特异性结合，简化重组氢化酶的纯化过程，提高氢化酶的产量；并通过与一种含黄素单核甘酸(FMN)的黄递酶(diaphorase,DI)相偶联，形成一条新的电子传递途径，利用氢气实现辅酶NADH的再生。本发明建立的重组高温镍铁氢化酶的表达纯化方法，具有步骤简单，酶产量高，生产成本低等特点；此外，本发明建立的辅酶再生体系，以氢气(气体)为底物，对反应体系的影响小，不会改变溶液的酸碱值，而且产物容易分离。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 高温 氢化 表达 纯化 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种高温镍铁氢化酶异源表达方法，其步骤包括；(1)将来源于极端嗜热厌氧古菌(Pyrococcus furiosus)的高温镍铁氢化酶编码基因插入穿梭载体；(2)将步骤(1)获得的载体转化极端嗜热厌氧古菌(Thermococcus kodakarensis)并表达。
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