[发明专利]一种基于微生物转化的脱水穿心莲内酯制备方法

摘要

本发明公开了一种基于微生物转化的脱水穿心莲内酯制备方法，包括如下步骤：步骤S1，菌种培养；步骤S2，微生物转化；步骤S3，转化产物提取；步骤S4，高速逆流纯化；其中，步骤S1中的发酵培养基中添加有有效浓度的离子液体。本发明提供的制备方法可以以常见易培养的短刺小克银汉霉为转化菌株，在发酵培养基中添加特定结构的功能离子液体，将穿心莲内酯转化为脱水穿心莲内酯；同时，若在发酵培养基中添加有效浓度的缬氨酸，可以提高该转化反应的选择性。

主权项

1.一种脱水穿心莲内酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1，菌种培养：将短刺小克银汉霉菌株CGMCC 3.970接种于新鲜斜面培养基上，25℃恒温培养3d；将菌体从斜面培养基转接至装有液体培养基的三角瓶中，振荡培养2d后成为种子液；吸取种子液转接至装有发酵培养基的三角瓶中，振荡培养2d后成为培养液；其中，所述液体培养基的配方为：去皮煮沸的土豆泥，200g/L；磷酸二氢钾，3g/L；硫酸镁，0.75g/L；葡萄糖，20g/L；维生素B1，0.15g/L；调节pH值至6.0；所述发酵培养基为在上述液体培养基中再添加40‑60μM季膦离子液体，阳离子结构如下：；其中，n=1或2或7，阴离子为Br^‑；或n=3，阴离子为Cl^‑；步骤S2，微生物转化：向上述发酵培养液中投入穿心莲内酯0.5‑1.5g/L，振荡培养3d进行转化；步骤S3，转化产物提取：转化终止后将转化液的pH值调节至5.2，静置过夜，抽滤，收集滤液，滤液用乙酸乙酯反复萃取，合并乙酸乙酯萃取液，蒸发回收乙酸乙酯即得转化产物；步骤S4，高速逆流纯化：用高速逆流色谱分离纯化转化产物中的脱水穿心莲内酯，溶剂系统为乙酸乙酯‑乙醇‑水‑甲酸，四者体积比为4:1:5:0.05，将该溶剂系统剧烈震荡后静置分层，将上下两相分开，上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集脱水穿心莲内酯对应流份，浓缩干燥即得；其中，高速逆流色谱的仪器的分离管为β值0.5‑0.8的多层聚四氟乙烯螺旋管，螺旋管直径2.3mm，工作转速为750r/min，所述高速逆流色谱的流动相流速为1.3mL/min，分离温度为35℃。