[发明专利]定性分析阿胶糕中胶类来源的方法

摘要

本发明涉及食品分析领域，公开了一种定性分析阿胶糕中胶类来源的方法。该方法使用丙酮作为阿胶糕中的明胶提取剂，并使用特定的胞内蛋白酶Lys‑C和胰蛋白酶使阿胶糕中不同胶类来源的多肽分解得到特征性的多肽片段，利用高效液相色谱仪‑线性离子阱轨道阱高分辨率组合型质谱仪联用装置，并选择单离子检测扫描模式对明胶酶解产物的分离和检测，记录得到的质谱图，并使用质谱图分析软件鉴定驴皮阿胶、猪皮明胶和牛皮明胶的特征性多肽。本发明提供的方法能用于阿胶产品中的阿胶、牛皮明胶和猪皮明胶鉴定，检测准确度高、重现性好，灵敏度高，可为相关部门监控阿胶食品品质提供依据。

主权项

1.一种定性分析阿胶糕中胶类来源的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)明胶的提取和纯化(1‑1)配制阿胶糕的分散液，将所得分散液进行过滤并收集滤液；(1‑2)将步骤(1‑1)收集的滤液与丙酮进行接触，并将接触后的混合物依次进行冷却静置处理和离心分离，收集离心分离后得到的沉淀物，其中，所述丙酮与所述滤液的用量的体积比为3‑6：1；(1‑3)将步骤(1‑2)收集的沉淀物重新分散于水中，然后进行超滤处理，收集分子量范围在5000‑30000Da的截留液，并将得到的截留液进行冷冻干燥，收集冷冻干燥物，得到纯化的明胶；(2)明胶的酶解(2‑1)在碳酸氢铵溶液的条件下，使用胞内蛋白酶Lys‑C和胰蛋白酶对步骤(1)得到的纯化的明胶进行酶解反应，所述胞内蛋白酶Lys‑C、胰蛋白酶和纯化的明胶的用量的重量比为1：0.5‑1.5：10‑200，所述胞内蛋白酶Lys‑C的酶活力为2000‑4000u/mg，所述胰蛋白酶的酶活力为5000‑10000u/mg；(2‑2)在酶解终止剂的存在下，终止上述酶解反应，得到最终酶解产物；(3)明胶酶解产物的分离和检测(3‑1)对步骤(2)得到的最终酶解产物进行脱盐处理；(3‑2)利用高效液相色谱仪‑线性离子阱轨道阱高分辨率组合型质谱仪联用装置对步骤(3‑1)经过脱盐处理的酶解产物进行分离和检测，并记录得到的质谱图，其中，所述线性离子阱轨道阱高分辨率组合型质谱仪的扫描模式为单离子检测扫描模式，所述单离子检测扫描模式的工作参数为：采谱区间间隔为100‑300Da，采谱时间为60‑120分钟；(4)数据分析(4‑1)确定驴皮阿胶、猪皮明胶和牛皮明胶的特征性多肽；(4‑2)使用质谱图分析软件鉴定步骤(3)记录的质谱图中的特征性谱峰，并与步骤(4‑1)中确定的驴皮阿胶、猪皮明胶和牛皮明胶的特征性多肽进行比对，确定驴皮阿胶、猪皮明胶和牛皮明胶分别占总明胶含量的1重量％时的特征性多肽的质谱信息。