[发明专利]一种富硒酵母培养工艺的优化方法及工艺

摘要

本发明公开了一种富硒酵母培养工艺的优化方法，其采取一种新型的亚硒酸钠的添加方式，不仅不会影响菌泥的产量，而且大大提高了硒的利用率，使无机硒尽可能的转化为有机硒，减少产品的毒性，具有极高的工业化应用，根据上述结果，调节摇床培养温度为23℃、初始pH为6.0、转速为120 rpm，培养基中含有1.0 g/L硫酸镁、2.0 g/L氯化钠、0.5 g/L磷酸二氢钾、2 g/L亚硒酸钠时，并且我们将亚硒酸钠均分为三等分，分别在发酵第一、二、三天加入培养基中，发酵7天可以获得约11.4 g干重菌泥、富硒量约331.7μg/g，并且有机硒转化率高达90.0%，相对与现存的产品，本发明大大节约了成本，适合现代化工业发展。

主权项

一种富硒酵母培养工艺的优化方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）选取酿酒酵母；（2）培养基的培养：培养基组分包括葡萄糖、蛋白胨和酵母膏，对这三个成分因素进行正交实验，得出发酵培养基的最佳配方，其中，正交实验时，装液量为50 mL/ 250 mL，接种量为5 %，温度为30 ℃，pH 为自然，转速为200 rpm，发酵48 h后测定其菌丝生物量；（3）培养条件的优化：采用正交实验，优化转速、温度、初始 pH 这三个变量，其中，装液量为 50 mL/ 250 mL，接种量为 5 %，发酵48 h后测定其菌丝生物量；（4）富硒条件的优化：正交实验结果，确定了酿酒酵母的最适的培养条件，选择不同添加时间、添加方式来添加亚硒酸钠，进行优化，达到硒的最大化利用；（5）生产效率测定：采用干重法，将菌丝发酵液 5000 rpm 离心 5 min，弃去上清液并收集菌丝，之后将培养的菌丝冷冻干燥机中冻干，其中，生产效率 g/L= 富硒产品干重 g ÷ 液体培养基的体积 L；（6）硒的测定：利用 3,3‑二氨基联苯胺比色法对硒的含量进行测定；（7）总硒含量的测定：酵母菌丝中硒含量测定：准确称取 1 g 富硒产物，放入烧瓶中，加入 10 mL 消化液， 4℃消化至无色透明为止，待冷却后，将此消化液转入 50 mL 容量瓶中，用NaOH 调节 pH 到 7.0 左右，最后将溶液定容到 50 mL，最后取 10 mL 消化样液，按 DAB比色法计算硒含量；（8）有机硒含量；准确称取酵母富硒产物 0.5 g，放入透析袋中，充分透析 24 h 后去除无机硒，取透析袋中物质，按上述方法进行硒含量测定；（9） 综合考虑富硒量和有机硒转化率，以确定最优的培养基硒浓度；富硒量 µg/g = 总硒含量 µg ÷ 菌丝干重 g；有机硒转化率 % = 有机硒含量 µg ÷ 总硒含量 µg × 100%；（10）氨基酸的测定：氨基酸的测定是利用反相高效液相色谱HPLC完成，该测定配备了Hypersil ODS C18 色谱柱，色谱柱为4 mm×125 mm，以 1 mL/min 的流速进行梯度洗脱，柱温为 40℃，移动相的配置为：缓冲液 A： 0.8 g 醋酸钠溶于 500 mL 超纯水，加入 90μL 三乙胺和 2.9 mL 四氢呋喃，最后用醋酸将 pH 值调整为 7.2±0.05；缓冲液 B： 0.8 g 醋酸钠溶于 100 mL 超纯水，加入 200 mL 甲醇，最后用醋酸将 pH 值调整为 7.2±0.05；洗脱程序设置为：缓冲液 A/ 缓冲液 B分别为 100:0， 50:50， 0:100， 0:100， 100:0 和 100:0，对应的时间分别是 0， 17， 20， 20.1， 24 和 24.1 min；邻苯二甲醛作为衍生试剂，检测波长设置为 338 nm，262 nm 用于检测脯氨酸；标准氨基酸均用 0.1 M HCl 配置成浓度为 1 mM 的储液，样品中各氨基酸的含量，通过标准品绘制的标准曲线计算得来，所有样品分析三次，取平均值；（11）数据处理与分析：试验数据进行单因子方差分析，多重比较，结果以平均数士标准差表示。