[发明专利]一种测定金霉素效价的方法

摘要

本发明涉及一种测定金霉素效价的方法，属于分析测试技术领域，所述方法以蜡样芽孢杆菌为试验菌种，采用管碟法进行金霉素效价的测定，该方法使用高灵敏度检定菌，可更加准确和灵敏地检测出样品中金霉素效价，用于金霉素低浓度的效价检测。该方法具有较宽的线性测试范围、准确度高、重复性好、中间精密度高和稳定性好等优点，较通用的微生物检定法的灵敏度高1000倍。

主权项

一种测定金霉素效价的方法，以蜡样芽孢杆菌为试验菌种，采用管碟法进行金霉素效价的测定，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)配制盐酸金霉素工作标准溶液精密称定适量盐酸金霉素，分别配制浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.08μg/mL、0.16μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液；(2)绘制标准曲线，获得载距a、斜率b和相关系数r的取值以浓度为0.04μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液分别作为浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.08μg/mL和0.16μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液的参比溶液，采用管碟法进行试验，通过抑菌圈自动测量分析软件绘制标准曲线，获得所述标准曲线的载距a、斜率b和相关系数r的取值及参比溶液产生的抑菌圈直径或面积的总平均值Y0p总；所述管碟法具体为：针对除参比溶液外的其它四种浓度的盐酸金霉素工作标准溶液，以所述每种盐酸金霉素工作标准溶液进行管碟法试验时，至少设置三个铺有蜡样芽孢杆菌菌层培养基的培养皿，每个培养皿中间隔放置六枚钢管，交叉滴定参比溶液和该盐酸金霉素工作标准溶液，然后在30℃下培养16‑18小时后，放入抑菌圈自动测量分析仪中进行测试；(3)金霉素样品效价测定精密称定适量金霉素样品，根据所述金霉素样品的估计效价配制金霉素浓度为0.04μg/mL的样品溶液，然后至少设置三个铺有蜡样芽孢杆菌菌层培养基的培养皿，每个培养皿中间隔放置六枚钢管，交叉滴定步骤(2)中的参比溶液和所述样品溶液，然后在30℃下培养16‑18小时后，放入抑菌圈自动测量分析仪中进行测试，通过抑菌圈自动测量分析软件，获得参比溶液产生的抑菌圈直径或面积的平均值Y0p及样品溶液产生的抑菌圈直径或面积的平均值Ykp，通过以下公式计算金霉素样品效价：金霉素样品效价＝C×稀释因子×10‑6×100％；式中：C为试验过程中样品溶液中金霉素的实际浓度，计算公式为Ykjz为校正直径或面积，计算公式为Ykjz＝Y0p总‑Y0p+Ykp；稀释因子的计算公式为：稀释因子＝2.5×107At，At为金霉素样品的估计效价。