[发明专利]一种光皮桦组培苗高效增殖方法

摘要

本发明涉及一种光皮桦组培苗高效增殖方法，包括如下步骤：（1）选取光皮桦优良单株当年生的半木质化枝条作外植体，经过外植体无菌处理后，接种到诱导培养基中培养，诱导不定芽；（2）将所述的不定芽转入继代培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；（3）将单个丛生芽接种到壮苗培养基中进行培养，获得健壮芽苗；（4）将所述健壮芽苗接至生根培养基中进行诱导生根培养，获得完整植株的生根苗。本发明的光皮桦优良单株的组织培养方法具有诱导率高、增殖倍数高及生根率高等优点，而且操作简单、易行，能获得较大的经济效益。

主权项

1.一种光皮桦组培苗高效增殖方法，其特征在于，包括如下步骤：外植体无菌处理：枝条采集前采用1000～1500倍的甲基托布津溶液对其进行灭菌处理，采集灭菌后的枝条并剪除叶片，清洗去除表面附着物，经清洗浸泡、流水冲洗、化学试剂消毒处理后，用解剖刀裁剪成带有一个腋芽的小茎段作为外植体；初代诱导培养：将步骤(1)处理后的外植体接种到初代诱导培养基中光照培养，培养温度为25℃～28℃，光照强度1000～1500Lux，光照时间10～12小时/天，培养25～30天后，获得不定芽；初代诱导培养基的配方包括以下组分：3/4MS培养基、1.0～5.0mg/L的6‑BA、0.01～0.05mg/L的NAA、40g/L的蔗糖和7.0g/L的琼脂粉，用1mol/L的NaOH溶液调节所述诱导培养基的pH值为5.8～6.0；继代增殖培养：将步骤(2)获得的不定芽切取长度1.5～2.0cm接入继代培养基中进行增殖培养，培养温度为25℃～28℃，光照强度1500～2000Lux，光照时间10～12小时/天，增殖培养25～30天后，获得丛生芽；继代增殖培养基的配方包括以下组分：MS培养基、3.0～5.0mg/L的6‑BA、0.01～0.1mg/L的NAA、30～50g/L的蔗糖和7.0g/L的琼脂粉，所述增殖培养基的pH值用1mol/L的NaOH溶液调至5.8～6.0；壮苗培养：将步骤(3)获得的丛生芽切割分成1棵芽/丛，接种到壮苗培养基中培养，培养温度为25℃～28℃，光照强度2000～2500Lux，光照时间10～12小时/天，壮苗培养20～25天后，获得壮芽；壮苗培养基的配方包括以下组分：3/4MS培养基、0.1mg/L的6‑BA、0.01mg/L的NAA、40g/L的蔗糖和7.0g/L的琼脂粉，所述壮苗培养基的pH值用1mol/L的NaOH溶液调为5.8～6.0；生根培养：将步骤(4)得到的壮芽接种到生根培育基中，培养温度为25℃～28℃，光照强度2000～2500Lux，光照时间12～16小时/天，生根培养25～30天后，获得完整的光皮桦植株组培苗；生根培养基的配方包括以下组分：1/3MS培养基、0.5～1.5mg/L的IBA、0.01～0.1mg/L的NAA、0.1～0.3mg/L的生根粉、20～40g/L的蔗糖和7.0g/L的琼脂粉，所述生根培养基的pH值用1mol/L的NaOH溶液调为5.8～6.0。