[发明专利]一种具有生物学结构和功能的人工食道的制备方法

摘要

本发明公开了一种具有生物学结构和功能的人工食道的制备方法，特点是取新鲜的哺乳动物食道留下粘膜和粘膜下层后进行脱细胞处理，并冻干保存；然后取新鲜的胎盘羊膜留下包含上皮细胞层、基底膜和无血管基质的完整羊膜组织后制得脱细胞羊膜，再将脱细胞羊膜平铺在冻干食道粘膜上，室温下晾干，得到具有生物学结构和功能的人工食道；优点是本方法所制得的人工食道在宏观形态和微观结构上模拟了人体正常食道组织，而且由于其能成功实现上皮化，在功能上也能最大限度地发挥食道组织的生物学功能，使得该人工食道更适宜替代患者或患病动物的部分病变食道。

主权项

一种具有生物学结构和功能的人工食道的制备方法，其特征在于包括以下具体步骤：（1）、取新鲜的哺乳动物食道清洗干净，剥离肌肉层，留下粘膜和粘膜下层；（2）、将粘膜和粘膜下层置于体积浓度为75～95%的酒精中漂洗3～10分钟，然后用清水洗去酒精；（3）、将粘膜和粘膜下层置于质量浓度为1～5%的曲拉通100中浸洗1～5天，期间每12小时换液一次，最后用PBS清洗；（4）、将粘膜和粘膜下层浸入温度为30～40℃的胰脂酶/PBS溶液中5～20小时，其中：胰脂酶在溶液中的浓度为1000～5000Ｕ/L，然后取出在体积浓度为75～95%的酒精中漂洗，再用PBS漂洗；（5）、将粘膜和粘膜下层浸入温度为30～40℃的DNA酶/PBS溶液中浸泡2～10小时，其中：DNA酶在溶液中的浓度为1000～5000U/L，然后取出用PBS漂洗；（6）、将粘膜和粘膜下层在体积浓度为75～95%的酒精中浸泡1～5小时，然后取出用PBS漂洗，并冻干保存；（7）、取新鲜的胎盘羊膜除去血块和绒毛膜，留下包含上皮细胞层、基底膜和无血管基质的完整羊膜组织，并用PBS清洗，得到干净半透明的羊膜；（8）、用体积浓度为75%的酒精将半透明羊膜漂洗1～2次，再用PBS漂洗2～4次，然后将由青霉素和链霉素组成的双抗混合到PBS中形成双抗/PBS溶液，其中：青霉素和链霉素在双抗/PBS溶液中的含量均为100～500U/L，再将半透明羊膜按体积比为1：1～3置于双抗/PBS溶液中浸泡震荡，每12小时换液一次，共两次；（9）、将青霉素、链霉素、曲拉通100混合到PBS中形成综合PBS溶液，其中：青霉素和链霉素在综合PBS溶液中的含量均为100～500U/L，曲拉通100在综合PBS溶液中的重量比为1～5%，再将半透明羊膜按体积比为1：1～3的比例置于综合PBS溶液中浸泡震荡，每6～8小时换液一次，共两次，然后将半透明羊膜取出，用PBS漂洗1～2次；（10）、将半透明羊膜按1：1～3的体积比浸泡在胰脂酶/PBS溶液中，其中：胰脂酶在胰脂酶/PBS溶液中的含量为500～5000U/L，并在溶液温度为30～40℃下处理5～20小时，然后将半透明羊膜取出用PBS漂洗1～2次，再将半透明羊膜按1：1～3的体积比浸泡在DNA酶/PBS溶液中，其中：DNA酶在DNA酶/PBS溶液中的含量为1000～5000U/L，并在溶液温度为30～40℃下处理2～5小时；（11）、将半透明羊膜从DNA酶/PBS溶液中取出，置于双抗/PBS溶液中震荡漂洗，其中：青霉素和链霉素在双抗/PBS溶液中的含量均为100～500U/L，每12小时换液一次，共两次，得到脱细胞羊膜，并将脱细胞羊膜放到PBS中，在4℃的温度下保存待用；（12）、将脱细胞羊膜平铺在步骤（6）制备得到的冻干食道粘膜上，室温下晾干，得到具有生物学结构和功能的人工食道。