[发明专利]一种可用于胶原分型的生物材料制备方法

摘要

本发明描述了一种可用于胶原分型的生物材料制备方法。属于生物技术领域。主要解决目前胶原蛋白酶法分解时对制品纯度的干扰问题，克服传统可用于胶原分型的生物材料由于酶解造成对测试结果干扰或对生物材料制备纯化的影响。

主权项

1.一种可用于胶原分型的生物材料制备方法，制备的肽段可用于胶原分型、电泳和架桥分析，也可用于生物材料的制备，其特征在于制备过程包括下列各步骤：(1)取市售或自制胶原溶于1～50ml的50～80％(v/v)乙酸溶液中，通氨气5～20min除氧；(2)加入CNBr固体10～80mg或浓度为90～99％(w/v)CNBr的乙酸溶液(所用乙酸浓度与上步骤一致)，再次通氨气1～5min；(3)密封容器中搅拌反应2～40小时，控制反应温度为4～35。℃，反应完成后，加入2～15倍的去离子水稀释并冻干；(4)冻干样品再加2～15倍的去离子水稀释并冻干，可如此反复多次，直至过量反应物和副产物脱除干净；(5)样品分离：使用市售翔丙基甲基纤维素或纤维素乙醇层析填料，起始缓冲液为0.01～0.05mol/L柠檬酸钠(PH2.0～4.5)缓冲液，洗脱缓冲液为0.10～0.33mol/L柠檬酸钠(PH2.0～4.5)缓冲液，柱清洗缓冲液为0.01～0.5mol/L NaOH缓冲液；(6)填柱温度为35～50℃，填柱缓冲液为柱清洗缓冲液，柱平衡用起始缓冲液进行，直至PH值达到2.0～4.5；(7)将冷冻干燥样品10～100mg溶解于2～200ml起始缓冲液中，30～50℃条件下加热处理8～20min后上柱，起始缓冲液与洗脱缓冲液梯度洗脱；(8)以226nm测定吸光度，分别收集峰I、峰II、峰III，冻干即为三个肽段。