[发明专利]单分子条件下检测前列腺特异抗原的方法

摘要

本发明涉及一种单分子条件下检测前列腺特异抗原的方法，提出利用DNA四面体构建三维的检测基底，在其上连接的核酸适配体（aptamer），识别并捕获PSA；引入连接aptamer的量子点，实现检测信号的测定，包括DNA四面体与aptamer组装、量子点与aptamer组装、载带aptamer的DNA四面体在玻片上的固定和检测。本发明利用DNA四面体作为三维修饰基底，减少界面的非特异性吸附，提高界面均一性及检测信噪比。利用DNA四面体支撑aptamer，减少界面对aptamer的吸附，提高对靶标的捕获能力。利用单分子的检测技术，对单个靶标进行可视化检测，进一步提高检测灵敏度和信噪比。

主权项

一种单分子条件下检测前列腺特异抗原的方法，其特征在于：利用DNA四面体构建三维的检测基底，在其上连接的核酸适配体aptamer，识别并捕获PSA；引入连接aptamer的量子点，实现检测信号的测定，包括下述步骤：（1）DNA四面体与aptamer组装：将DNA 1‑5混合均匀，于高盐浓度缓冲液中高温退火形成载带有aptamer的DNA四面体，也称DNA四面体与aptamer组装体；（2）量子点与aptamer组装：将量子点与生物素修饰的aptamer DNA 6在1×PBS缓冲溶液中混合均匀，于室温孵育；随后混合液离心洗去过量DNA，沉淀物采用PBS缓冲溶液重旋，4℃保存；（3）载带有aptamer的DNA四面体在玻片上的固定：将DNA四面体与aptamer组装体稀释后，与链霉亲和素修饰的玻片孵育，孵育浓度为10‑10 ~10‑9孵育一定时间后，缓冲液冲洗干净过量组装体；（4）检测：制备样品池，在样品池中滴加100 μL含有PSA的反应溶液，孵育一定时间后，洗去过量PSA；加入一定浓度的连接有aptamer的量子点，孵育一定时间后，洗去过量的量子点；首先激光激发四面体所带荧光，随后更换激光通路，激发量子点荧光，通过二者共定位确定信号采集位点。