[发明专利]利用茎尖组织繁殖大花蕙兰种苗的方法

摘要

本发明提供了利用茎尖组织繁殖大花蕙兰种苗的方法，所述方法包括外植体的选取；侧芽消毒；原球茎诱导培养；原球茎增殖培养；原球茎分化培养和生根壮苗培养。本发明诱导阶段提高原球茎诱导率；增殖阶段降低原球茎变异率和玻璃化率；分化阶段降低芽变异率，生根壮苗阶段种苗生长发育更加健壮，新根缠结比率降低，根系更加分散与伸展，同时种苗变异率降低。

主权项

1.一种利用茎尖组织繁殖大花蕙兰种苗的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤a，外植体的选取，切取大花蕙兰母株基部长出的6‑12cm的健壮侧芽；步骤b，侧芽消毒，对切取的侧芽进行消毒，切下茎尖组织作为培养的外植体；步骤c，原球茎诱导培养，将外植体接种到原球茎诱导培养基上，培养30‑60天，培养温度为25‑28℃，光照时间为8‑14h/d，光照强度为1000‑2000lux诱导得到原球茎；所述诱导培养基由以下成分组成：花宝3号2g/L，水解酪蛋白3g/L，腺嘌呤1g/L，活性炭1g/L，琼脂7g/L，蔗糖20g/L；步骤d，原球茎增殖培养，将诱导形成的原球茎团切割成小块，每块含3‑5个原球茎，接种到增殖培养基中，逐渐形成新的原球茎，反复切割增殖，每30‑40天继代转接一次；所述增殖培养基的成分与诱导培养基成分相同；步骤e，原球茎分化培养，将增殖得到的原球茎团切割成小块，每块含5‑10个原球茎，接种到分化培养基中进行分化培养，原球茎分化出新叶新根；分化培养基由以下成分组成：花宝3号2g/L，水解酪蛋白3g/L，腺嘌呤1g/L，TDZ0.1 mg/L，活性炭1g/L，琼脂7g/L，蔗糖20g/L；步骤f，生根壮苗培养，切取分化培养后高5‑6cm的芽，接种到生根壮苗培养基中进行培养，得到生长健壮的种苗，其中生根壮苗培养基由以下成分组成：花宝1号1‑4g/L，硝酸钾0.7‑2.1g/L，七水硫酸亚铁18‑32mg/L，二水乙二胺四乙酸二钠30‑43g/L，水解酪蛋白2‑4g/L，腺嘌呤0.5‑1.5g/L，土豆泥12‑28g/L，香蕉泥35‑65g/L，椰子汁50‑150mL，活性炭0.5‑1.5g/L，琼脂6‑8g/L，蔗糖14‑27g/L。