[发明专利]一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法

摘要

本发明公开一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法，利用引物plb16A、mlb16A、plb16B、mlb16B、plb16X、mlb16X及高保真DNA聚合酶PCR扩增待检菌株16SrDNA片段，扩增产物经引物上的限制性内切酶AhdI、BmrI、XcmI酶切，纯化后与T载体进行连接，连接产物转化大肠杆菌，筛选连接子后提质粒进行测序、比对，初步鉴定所测菌株是否为嗜酸乳杆菌NCFM。本发明优点是扩增产物的长度可鉴定嗜酸乳杆菌；扩增产物经AhdI、BmrI、XcmI酶切后的长度可鉴定嗜酸乳杆菌；扩增产物使用高保真DNA聚合酶扩增，扩增的产物错配率低,连入T载体后测序、比对，结果可初步鉴定嗜酸乳杆菌NCFM。

主权项

一种检测、鉴定嗜酸乳杆菌NCFM的方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)提取待检细菌的基因组DNA；(2)以提取的细菌的基因组DNA为模板，使用高保真DNA聚合酶及引物PCR扩增，扩增产物经酶切、纯化后进行TA克隆；(3)筛选TA克隆的阳性转化子，提质粒进行测序及比对，初步鉴定嗜酸乳杆菌NCFM；所述三对引物的序列为：plb16A:ACGAGACTTTGAGTCTGGCTCAG，mlb16A:ACCGACGCTGCGTCCACGTAGTTAG,plb16B:TTAACTGGGAGAGTTTGATCCTGGCTCAG,mlb16B:GTAACTGGGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAG,plb16X:ACGCCAGTTTTATCCTGGCTCAG，mlb16X:TATCCACGCGTCTGCTGGCACGTAGTTAG。