[发明专利]一种超临界CO2萃取林蛙卵雌二醇的方法

摘要

本发明公开了一种超临界CO₂萃取林蛙卵雌二醇的方法，其方法如下：（1）预处理制得林蛙卵粉，（2）选用超临界CO₂萃取方法进行林蛙卵雌二醇的萃取。本发明使萃取过程充分接触，萃取率高，不添加任何其他成分，雌二醇纯度高、质量好。

主权项

1.一种超临界CO₂萃取林蛙卵雌二醇的方法，其特征在于：（1）预处理试验原料为长白山新鲜林蛙卵，经干燥粉碎处理后备用；（2）超临界CO₂萃取准确称取 4550 g干燥粉碎后的林蛙卵粉装入料筒，将料筒装入萃取缸，装上料筒O型圈再放入通气环，盖好压环及上堵头，进行萃取试验；在林蛙卵雌二醇萃取过程中选取萃取压力 15、20、25、30、35MPa，萃取温度37、42、47、52、57℃，CO₂流量 8、10、12、14、16 kg/h和萃取时间 30、60、90、120、150 min，以林蛙卵雌二醇的萃取得率为考察指标，进行单因素试验；雌二醇萃取得率按下列公式计算：得率=（提取物质量/林蛙卵粉质量）×100 %；（3）酶联免疫分析（ELISA）检测超临界CO₂萃取林蛙卵中雌二醇的含量ELISA 试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中林蛙雌二醇（E2）水平；用纯化的林蛙雌二醇（E2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇（E2），再与 HRP 标记的雌二醇（E2）抗体结合，形成抗体—抗原—酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色；TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色；颜色的深浅和样品中的雌二醇（E2）呈正相关；用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中林蛙卵雌二醇（E2）含量；在酶标包被板上设标准孔10孔，依次稀释后各孔加样量都为50μL，浓度分别为 48、32、16、8、4 ng/L；以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，得到标准曲线为：y=（‑1.8198）+25.48401x，R² = 0.9991；将样品的 OD 值代入方程，计算出样品的浓度，再乘以稀释倍数得到超临界萃取林蛙卵中雌二醇的含量为38.11 ng/L。