[发明专利]一种快速检测乳中单增李斯特活菌的方法在审
| 申请号： | 201711082478.3 | 申请日： | 2017-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN109750089A | 公开（公告）日： | 2019-05-14 |
| 发明（设计）人： | 付世骞;冯晓涵;张紫薇;姜毓君;满朝新 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 刘景祥 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速检测乳中单增李斯特菌活菌的方法，属于食品安全技术领域。该方法是向受检乳中加入PMA，然后置于暗处孵育，接着卤素灯曝光；加入柠檬酸钠和氢氧化钠，经离心，弃上清，洗涤等一系列操作后，提取DNA；以提取物作为模板进行LAMP扩增，得到LAMP扩增产物；利用琼脂糖凝胶电泳法观察条带的有无对LAMP扩增产物进行鉴定，即完成检测。本发明方法耗时较短，检测灵敏度高，可以显著减少原料乳加工前和成品出厂前待检结果的储藏时间。对液体乳中单增李斯特菌活菌的检出限为6.37×101CFU/mL，可广泛应用于快速检测食品中的单增李斯特活菌。 | ||
| 搜索关键词： | 活菌 快速检测 李斯特菌 琼脂糖凝胶电泳法 快速检测食品 检测灵敏度 暗处孵育 柠檬酸钠 氢氧化钠 食品安全 提取DNA 检出限 卤素灯 受检乳 提取物 液体乳 原料乳 条带 洗涤 出厂 耗时 曝光 检测 观察 加工 应用 | ||
【主权项】：
1.一种快速检测乳中单增李斯特活菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)待检乳样的前处理：向待检乳中加入PMA，然后置于暗处进行预孵育，接着置于650W卤素灯下照射曝光；本步骤操作均在冰浴上进行；(2)样品DNA的提取：向步骤(1)处理后的待检乳中加入柠檬酸钠和氢氧化钠，然后离心，弃上清，得沉淀；(3)用质量浓度为0.85％的生理盐水洗涤沉淀，然后离心，弃上清，用细菌基因组DNA提取试剂盒进行DNA的提取，得到提取物；(4)以提取物作为模板进行LAMP扩增，得到LAMP扩增产物；(5)鉴定：取LAMP扩增产物，点样于质量浓度为2％的琼脂糖凝胶中，以100V电压在1×TAE电泳缓冲液中电泳30min，然后在凝胶成像系统中成像，即完成检测；若产生LAMP特异性扩增条带，表明该待检乳中含有单增李斯特活菌，若无LAMP特异性扩增条带，表明该待检乳中不含有单增李斯特活菌。
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