[发明专利]猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒二联灭活疫苗以及其制备方法

摘要

本发明提供了一种猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒二联灭活疫苗以及其制备方法，灭活前，两种病毒的含量均≥10^7.0TCID50/mL，灭活后各个抗原的体积比例为1:1。本发明的二联灭活疫苗解决了目前市场上缺少有效的防治猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒病两种疾病联苗的问题，尤其是解决了缺少近些年新流行的猪δ冠状病毒病的疫苗。该发明的二联灭活疫苗经济实用，有效地降低防疫成本，为国内养殖企业同时预防两种疾病的发生提供了一种新的方法。

主权项

1.一种猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒二联灭活疫苗，其特征在于，所述二联灭活疫苗中抗原成分在灭活前为猪流行性腹泻病毒和猪δ冠状病毒，其中，猪流行性腹泻病毒的含量≥10^7.0TCID₅₀/mL、猪δ冠状病毒的含量≥10^7.0TCID₅₀/mL；所述猪流行性腹泻病毒微生物保藏号是CGMCC No.12663；保藏时间是2016年08月23日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；所述猪δ冠状病毒的微生物保藏号是CGMCC No.13853；保藏时间是2017年06月07日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；所述二联灭活疫苗中含有佐剂，抗原与佐剂的质量比例为1:1；所述佐剂为Montanide ISA 206佐剂；所述二联灭活疫苗是由猪流行性腹泻病毒和猪δ冠状病毒灭活后制备获得，灭活后各个抗原的体积比例为1:1；所述疫苗的制备过程包括以下步骤：1) 猪流行性腹泻病毒液制备：将长满致密单层的Vero细胞，按0.2%剂量接种猪流行性腹泻病毒，并加入含有胰酶的维持液，在37℃下培养；2) 猪δ冠状病毒液制备：将长满致密单层的ST细胞，按2%剂量接种猪δ冠状病毒，并加入含有胰酶的维持液，在37℃下培养；3) 当细胞病变在80％以上时，分别收获病毒，并反复冻融2次后，保存于‑20℃以下备用；4) 对收获的病毒液进行病毒含量和无菌检验，将病毒含量在10^7.0TCID₅₀/mL以上、无菌检验合格的病毒液用于灭活；5) 两种病毒液分别用BEI灭活，灭活检合格后，按照体积比例为1:1进行混合；6) 与Montanide ISA 206佐剂按照质量比例为1:1乳化即可制成双相油乳剂联苗。