[发明专利]一种基于磁珠技术的微流控芯片检测方法

摘要

本发明公开了一种基于磁珠技术的微流控芯片检测方法，包括步骤为：步骤1，荧光标记；步骤2，磁珠标记；步骤3，封闭液的涂覆与烘干；步骤4，免疫磁珠的固定；步骤5，荧光标记物的固定；步骤6，微流控芯片组装；步骤7，加样准备；步骤8，免疫反应；步骤9，清洗；步骤10，显色；步骤11，数据读取。本发明选取高灵敏度的时间分辨荧光染料作为标记物，分别在磁珠和荧光物质上进行抗体的标记，利用抗体对的免疫反应进行分析检测，所制备的试剂性能可达同等化学发光试剂的水平。同时，试剂采用均相液体反应，实现液体流动的控制，在微流控芯片腔室内采用超声混合，避免了单线程的层析流动反应，使得反应更充分，反应效率更高。

主权项

1.一种基于磁珠技术的微流控芯片检测方法，其特征在于：包括如下步骤：/n步骤1，荧光标记：采用时间分辨荧光分析法对已透析的抗体原料进行标记，并收集荧光标记物；/n步骤2，磁珠标记：将磁珠与抗体溶液进行反应，反应结束后，对磁珠进行封闭清洗，并使用磁珠保存液复溶后，形成免疫磁珠；其中，与抗体溶液进行反应的磁珠选取表面含有甲苯磺酰基的磁性微球；/n步骤3，封闭液的涂覆与烘干：向微流控芯片的定量-反应腔添加封闭液进行封闭，然后，将封闭液烘干处理；封闭液包含有2%的BSA、0.5%的Tween-20、10%的海藻糖以及0.2%的甘露醇；其中，采用封闭液对定量-反应腔进行封闭的具体方法为：下层芯片上定量-反应池的每个隔腔中均添加5µL的封闭液，中层芯片上反应池盖板的每个盖板分体中均添加6µL的封闭液；封闭液添加后，在45℃烘箱下，进行烘干处理5min；定量-反应腔采用透明的光学器件，能有效的检测光信号，且荧光分子稳定存在，不受时间和激发次数的影响；/n步骤4，免疫磁珠的固定：步骤3中的封闭液烘干后，将步骤2磁珠标记后形成的免疫磁珠添加至中层芯片上的反应池盖板中，然后，烘干，使免疫磁珠与中层芯片固定；/n步骤5，荧光标记物的固定：步骤3中的封闭液烘干后，将步骤1收集的荧光标记物添加至下层芯片上定量-反应池的中间隔腔中，然后，烘干，使荧光标记物与下层芯片固定；封闭液的使用，则有效隔断微控芯片以及液体试剂，使得免疫磁珠和荧光标记物能够固定在微控芯片内部不随意流动；同时在加入样本以及稀释液时能迅速溶解并保持原有的生物活性；封闭液同时还起到防止荧光标记物在微控芯片内的吸附的作用，荧光标记物由于不直接与微控芯片接触，因此降低了非特异性的吸附；/n步骤6，微流控芯片组装：将上层芯片、固定有免疫磁珠的中层芯片以及固定有荧光标记物的下层芯片，依次进行组装合并；/n步骤7，加样准备：移液器加样，吸取样本加入步骤6组装完成的微流控芯片的加样孔内；随后，将加样完成的微流控芯片进入检测仪器内，微流控芯片与芯片接触装置结合；芯片接触装置中的气路装置缓慢充气，推动样本往前移动，气体由透气口流出，样本流入定量-反应腔内，并分别与烘干状态的免疫磁珠和荧光标记物相接触；当样本继续向前移动并接触到定量-反应腔末端的导电橡胶时，电容变化，触动流道阀门开关，使流道阀门关闭；同时，关闭气路开关，停止加压；/n步骤8，免疫反应：开启超声发生器，对步骤7加样完成的微流控芯片的定量-反应腔进行超声处理，使免疫磁珠与荧光标记物复溶，并与样本进行混合，进行免疫反应；免疫反应时间控制在5-10分钟；/n步骤9，清洗：免疫反应结束后，强磁体对磁珠免疫复合物进行磁固定，气体推动样本向前移动，吹干加样孔和流道样本，清洗液路装置启动，进入定量-反应腔内，调控强磁体，开启超声装置，超声混匀1-3分钟，进行清洗；清洗结束后，对定量-反应腔施加磁力，再次固定磁珠免疫复合物，将多余的样本以及荧光标记物清洗至废液回收区；接着，加样口处的气体推动清洗液继续进行移动，吹干定量-反应腔和流道液体，并撤除强磁力；/n步骤10，显色：增强液液路装置启动，进入流道内，进入定量-反应腔内，控制定量增强液的加入，超声混匀3-8分钟，进行显色反应；/n步骤11，数据读取：读取微流控芯片上定量-反应池中的荧光强度，计算并给出结果报告。/n