[发明专利]一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法

摘要

本发明提供一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，包括液氮研磨；trizol裂解；取中间红色透明裂解液去除脂肪层；氯仿萃取；异丙醇沉淀；75%乙醇溶液两次洗涤；滤纸干燥等步骤。本发明通过增加单位体积trizol的牛脂肪组织裂解量和延长裂解时间，明显的提高了RNA产量；裂解后加入氯仿前离心，可以避免脂类对后续步骤的干扰；沉淀RNA时，调低离心加速度，可以有效的将RNA沉淀收集至底部；滤纸呈扇形，便于深入离心管中快速吸干液体，加速RNA干燥，以提高RNA的复融效率和纯化效果。总之，本发明克服了脂肪组织干扰物质多，单位质量RNA含量低的缺点，显著提高了脂肪组织提取RNA的产量，且纯度好，操作简单。

主权项

一种从牛脂肪组织中提取总RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：取牛脂肪组织，在液氮环境中研磨至粉末状，迅速转移至预冷的离心管中；步骤2：向步骤1的离心管中加入trizol，使用振荡器振荡5～20分钟，然后裂解1小时，得裂解液，离心，去除上层脂肪层与底部不溶物，取中间红色透明裂解液；步骤3：在步骤2所得中间红色透明裂解液中，缓慢加入氯仿，手动振荡混匀，于冰上静置5～20min，然后离心，取透明上清液；步骤4：在步骤3所得透明上清液中，缓慢加入预冷的异丙醇，于冰上静置5～20min，然后离心，弃上清液，得底部沉淀；步骤5：在步骤4所得底部沉淀中，加入体积分数为75%的乙醇溶液，轻微振荡，使底部沉淀悬浮，离心，弃上清液，得第一次底部沉淀，再次加入体积分数为75%的乙醇溶液，轻微振荡，使底部沉淀悬浮，离心，弃上清液，得第二次底部沉淀；步骤6：取步骤5所得第二次底部沉淀，使用滤纸吸干离心管内的液体，干燥7～10min，然后加入DEPC处理水溶解。