[发明专利]一种金毛狗脊孢子的组培方法

摘要

本发明公开了一种金毛狗脊孢子的组培方法，采摘野生金毛狗植株上长有孢子囊群的羽片，收集孢子囊，用0.1％的升汞溶液消毒并冲洗，晾干后收集于无菌袋中，然后将无菌袋于2‑6℃保藏340‑380天后，破开孢子囊收集孢子，并用70％‑75％的酒精消毒并冲洗，再用2‑5％的次氯酸钠消毒离心并冲洗，然后制成孢子悬液；将孢子悬液涂布接种孢子萌发培养基进行萌发培养，当原叶体长出后转接至孢子体培养基进行配子体转化培养；当配子体长出第3片叶后，转移至营养穴中炼苗培养，最后进行田间移栽。本发明的金毛狗脊孢子培养方法，操作过程简单，种苗生长整齐，植株生命力强，成活率高；适合推广使用。

主权项

一种金毛狗脊孢子的组培方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)孢子的采集：采摘野生金毛狗植株上长有孢子囊群的羽片，置清洁袋中自然阴干，待孢子囊自然脱落后去除杂质，收集孢子囊，用0.1％的升汞溶液作用4‑6分钟后，再用无菌水冲洗3‑5次，晾干后收集于无菌袋中；(2)孢子预处理：将步骤(1)获得的含有孢子囊的无菌袋置于2‑6℃保藏340‑380天，破开孢子囊收集孢子，并用70％‑75％的酒精对孢子消毒20‑40秒后离心，无菌水冲洗2‑3次，再用2‑5％的次氯酸钠对孢子消毒4‑10分钟离心，再用无菌水冲洗2‑3次；收集消毒的孢子加入无菌生理盐水制成孢子悬液；(3)接种与培养：将步骤(2)获得的孢子悬液取0.05‑0.1ml接种至装有孢子萌发培养基的组培罐中，涂布使孢子悬液均匀分布于培养基表面，于光照培养箱中进行萌发培养，温度22‑28℃、每天2000‑2500Lx光照10‑12小时；当原叶体长出后，将原叶体接种至含有孢子体培养基的培养罐中，于光照培养箱中进行配子体转化培养，温度22‑28℃、每天2000‑2500Lx光照10‑12小时；(4)炼苗移栽：当配子体长出第3片叶后，冲洗干净配子体根部培养基转移至含有营养土的营养穴中，每天喷雾1‑2次保持湿度，在室温和自然光照条件下培养15‑30天后进行田间移栽。