[发明专利]诱导干细胞成软骨分化的II型胶原水凝胶的制备方法

摘要

本发明公开了一种诱导干细胞成软骨分化的II型胶原水凝胶的制备方法，首先通过II型胶原侧链赖氨酸ε‑氨基与甲基丙烯酸酐的酰胺化反应，合成了具备可光交联性且保持II型胶原三螺旋构象完整性的可光交联II型胶原；再在光引发剂的作用下，引发可光交联II型胶原聚合交联形成具有一定力学强度且可调的单组份II型胶原水凝胶，为干细胞提供生物仿生的分化微环境。

主权项

1.一种诱导干细胞成软骨分化的II型胶原水凝胶的制备方法，其特征在于步骤如下：(1)配制II型胶原溶液在常压、0-4℃下，将II型胶原溶解于pH值为1-3的酸溶液中得到质量浓度为1-4mg/mL的II型胶原溶液；(2)合成可光交联II型胶原在常压、0-4℃下，用磷酸盐缓冲液或/和氢氧化钠溶液调节II型胶原溶液的pH值为7＜pH值≤8，然后加入甲基丙烯酸酐在常压、0-4℃搅拌反应2-12h，反应过程中补充氢氧化钠溶液使反应体系的pH值满足7＜pH值≤8，甲基丙烯酸酐的加入量按II型胶原溶液中的氨基与甲基丙烯酸酐的摩尔比为1:(0.2-5)计量；反应结束后除去所得反应液中未反应的甲基丙烯酸酐，然后将除去未反应的甲基丙烯酸酐后的反应液冷冻干燥得到可光交联II型胶原，或将除去未反应的甲基丙烯酸酐后的反应液装入透析袋，在常压、0-4℃下将该盛液透析袋浸入质量浓度为10％-50％的聚乙二醇水溶液中浓缩4-24h得到含有可光交联II型胶原的浓缩液；(3)制备光交联II型胶原水凝胶在常压、0-4℃下，用pH值为1-3的酸溶液将可光交联II型胶原溶解得到可光交联II型胶原溶液，并用氢氧化钠溶液调节pH值至7.0-7.5，再向调节pH值之后的可光交联II型胶原溶液中加入光引发剂，配制成可光交联II型胶原终浓度为4-10mg/mL、光引发剂终浓度为0.2-1mg/mL的凝胶预聚液，然后在常压室温下将凝胶预聚液置于紫外光下照射10-60s，即得到II型胶原水凝胶；或者在常压、0-4℃条件下，将含有可光交联II型胶原的浓缩液用氢氧化钠溶液调节pH值至7.0-7.5，再向调节pH值之后的可光交联II型胶原溶液中加入光引发剂，配制成可光交联II型胶原终浓度为4-10mg/mL、光引发剂终浓度为0.2-1mg/mL的凝胶预聚液，然后在常压室温下将凝胶预聚液置于紫外光下照射10-60s，即得到II型胶原水凝胶。