[发明专利]一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法

摘要

本发明涉及一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法，包括以下步骤种子液的制备；将出芽短梗霉菌的原始菌株接种在斜面培养基上培养活化；将活化后的斜面种子接种于种子培养基中，得产聚苹果酸的种子液；将种子液接种于发酵培养基中发酵；发酵结束后离心去菌体，醇沉析出聚苹果酸。本发明通过改变固有发酵模式，采用不同时间点放出发酵液，并补充相同体积发酵培养基，同时调节发酵pH，从而使各时间点所获得的聚苹果酸分子量不同，已达到获得不同分子量聚苹果酸的目的。相较于通过分批发酵，分批获得不同分子量的聚苹果酸而言，半连续发酵所需发酵时间更短，发酵稳定性更加良好。

主权项

一种半连续法生产不同分子量聚苹果酸的方法，其特征是，包括以下步骤：（1）种子液的制备；将出芽短梗霉菌株活化2~3h，然后用无菌生理盐水洗下斜面菌株的孢子，制备孢子悬液，按照10%的接种量将孢子悬液转接到含有种子培养基中进行培养，培养温度25℃，摇床转速为200r/min，培养时间为40h，制得种子液；（2）发酵罐发酵：将所得种子液以10%的量接于发酵培养基中进行发酵培养，初始转速300r/min，通风量2.5‑3V·V·m，罐压在0.1MPa，温度为25‑28℃；在发酵时间至90h‑108h放出45%体积的发酵液，记作第一批发酵液；同时往发酵罐中补充与放料体积相同的发酵培养基后，调节PH为6.0‑7.0；继续发酵98‑100h后，再放出50%发酵液，该批发酵液记为第二批发酵液，同时往发酵罐中补充与放料体积相同的发酵培养基后，调节PH为6.0‑7.0；继续发酵96‑108h后停止发酵，终产发酵液记为第三批发酵液；（3）提取：将上述的三批发酵液分别提取后，干燥，分别得到三种分子量不同的聚苹果酸。