[发明专利]一种同步检测5种动物源性成分的多重PCR方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种同步检测5种动物源性成分的多重PCR方法，该方法包括如下步骤提取待检动物组织的DNA，并对其进行多重PCR扩增；对多重PCR的产物进行凝胶电泳分析，根据PCR产物条带大小和有无判定样品中是否含有5种动物源性成分。本发明的同步鉴定五种动物源性成分的PCR方法具有操作简单、特异性强、灵敏度高、节约成本和检测时间等优点，较常规PCR可实现对五种动物源性成分的同时检测，为有效鉴别肉制品的真假提供技术支撑。

主权项

一种同步检测5种动物源性成分的多重PCR方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)提取待检动物组织的DNA，并对其进行多重PCR扩增，PCR反应体系为：5×PCR Buffer 10μL，dNTP Mix 0.2mmol/L，Taq DNA聚合酶2.5U，MgCl2 2mmol/L，引物配比为牛：羊：鸡：猪：鸭＝2:1:1:1:0.5，用dd H2O补足体系至50μL。最终反应体系中牛、羊、鸡、猪和鸭的正、反引物浓度分别为1mmol/L，0.5mmol/L，0.5mmol/L，0.5mmol/L和0.25mmol/L。多重PCR反应程序如下：94℃预变性5min；94℃变性40s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸5min；(2)对多重PCR的产物进行凝胶电泳分析，根据PCR产物条带大小和有无判定样品中是否含有5种动物源性成分，其中牛、羊、鸡、猪和鸭扩增后所获目的条带大小分别为：493bp、302bp、400bp、277bp、239bp；其中所述的引物为：牛：上游引物：SEQ NO.1 5′‑tagcaattgccatagtccac c‑3′下游引物：SEQ NO.2 5′‑taggatgaggagaaagtataggaca‑3′；羊：上游引物：SEQ NO.3 5′‑cgccatagttcacctactct tc‑3′下游引物：SEQ NO.4 5′‑ttactaggactaggattgag aggat‑3′；鸡：上游引物：SEQ NO.5 5′‑cttccttcacatcggacgag‑3′下游引物：SEQ NO.6 5′‑gggtgagtatgagagttaag cc‑3′；猪：上游引物：SEQ NO.7 5′‑aatttttggggatgcttaga ct‑3′下游引物：SEQ NO.8 5′‑tattttgggaggttattgtg ttgta‑3′；鸭：上游引物：SEQ NO.9 5′‑cgaggcttctactacggc‑3′下游引物：SEQ NO.10 5′‑gggtgattcctgcgatta‑3′。