[发明专利]将大肠杆菌表达的融合蛋白转化为利拉鲁肽的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201711154044.X | 申请日： | 2017-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN107881187A | 公开（公告）日： | 2018-04-06 |
| 发明（设计）人： | 黄亮;曹永恒;陈亮航;曹春来;周翠;夏志成 | 申请（专利权）人： | 珠海联邦制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/605;C12N15/62 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司44245 | 代理人： | 裘晖,苏运贞 |
| 地址： | 519040 广东省珠海*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种将大肠杆菌表达的融合蛋白转化为利拉鲁肽的制备方法及应用。本发明通过将具有融合基因的大肠杆菌工程菌株进行发酵，诱导，提取含有融合蛋白的包涵体或者融合蛋白，用变性溶液将其充分溶解变性，并加入有机溶剂、缚酸剂及脂肪酸活化物，使融合蛋白与脂肪酸活化物酰化连接，再加入工具酶进行酶切，得到利拉鲁肽；其中，融合基因具有形如A‑B‑C结构的基因序列，其中A为伴侣蛋白编码基因，B为连接肽编码基因，C为Arg34‑GLP‑1(7‑37)片段编码基因。本发明直接将修饰、酶切融合于一个工段，无需专门纯化富集融合蛋白就可以得到利拉鲁肽分子，工艺简单，成本低，更适合工业化放大生产利拉鲁肽。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 表达 融合 蛋白 转化 利拉鲁肽 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种将大肠杆菌表达的融合蛋白转化为利拉鲁肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将具有融合基因的大肠杆菌工程菌株进行发酵，诱导，提取含有融合蛋白的包涵体或者融合蛋白；其中，融合基因具有形如A‑B‑C结构的基因序列，其中A为伴侣蛋白编码基因，B为连接肽编码基因，C为Arg34‑GLP‑1(7‑37)片段编码基因；(2)将步骤(1)中获得的融合蛋白或者含有融合蛋白的包涵体在变性溶液充分溶解变性，并加入一定量的有机溶剂、缚酸剂及脂肪酸活化物，得到反应体系，反应，使融合蛋白与脂肪酸活化物酰化连接；(3)待步骤(2)反应完成后加入工具酶，得到酶切体系；酶切，得到利拉鲁肽。
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