[发明专利]一种维洛丝肽的液相合成方法

摘要

本发明公开了一种维洛丝肽的液相合成方法，该方法采用“2+“1+2””的片段法，先将Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH和H‑Pro‑Ala‑NH2或其盐酸盐或三氟乙酸盐缩合生成Fmoc‑Arg(Pbf)‑Pro‑Ala‑NH2，然后与哌啶作用脱除Fmoc保护基后再与Boc‑Gly‑Pro‑OMe反应，生成全保护五肽，经三氟乙酸脱保护、盐酸成盐后得H‑Gly‑Pro‑Arg‑Pro‑Ala‑NH2·HCl，再经离子交换得维洛丝肽。本发明通过脱保护胺酯交换采用“一锅法”合成维洛丝肽，相比传统固相合成以逐个延长肽链的方式可明显提高反应产率，避免高成本、高毒性溶剂的大量使用，具有易于规模化、中间体纯度高无需柱层析、原辅料用量少、成本低廉且对环境友好等特点。

主权项

一种维洛丝肽的液相合成方法，其特征在于该方法由下述步骤组成：(1)以四氢呋喃为溶剂，将Boc‑Gly‑OH、N‑羟基丁二酰亚胺、N,N’‑二环己基碳酰亚胺在0～15℃下反应3～5小时，过滤除去不溶物，向滤液中加入H‑Pro‑OMe·HCl和碳酸氢钠水溶液，在15～25℃下反应8～12小时，分离纯化，得到Boc‑Gly‑Pro‑OMe；(2)以二氯甲烷或四氢呋喃为溶剂，在‑15～‑10℃下，将Boc‑Pro‑OH或Fmoc‑Pro‑OH和氯甲酸异丁酯、有机碱反应10～45分钟，再与H‑Ala‑NH2反应1小时，然后升至室温反应6～8小时，分离纯化，得到Boc‑Pro‑Ala‑NH2或Fmoc‑Pro‑Ala‑NH2，然后用氯化氢的乙酸乙酯溶液脱除Boc保护基得到H‑Pro‑Ala‑NH2·HCl或用三氟乙酸的四氢呋喃溶液脱除Boc保护基得到H‑Pro‑Ala‑NH2·TFA，或用哌啶的四氢呋喃溶液或浓氨水溶液脱除Fmoc保护基，得到H‑Pro‑Ala‑NH2；(3)以二氯甲烷为溶剂，在‑15～‑5℃下，将Fmoc‑Arg(Pbf)‑OH、1‑羟基苯并三唑、有机碱和N‑乙基‑N′‑(3‑二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐反应30～60分钟，再与H‑Pro‑Ala‑NH2或H‑Pro‑Ala‑NH2·HCl或H‑Pro‑Ala‑NH2·TFA反应30～60分钟，然后升至室温反应6～8小时，分离纯化，得到Fmoc‑Arg(Pbf)‑Pro‑Ala‑NH2；(4)用哌啶的N,N‑二甲基甲酰胺溶液脱除Fmoc‑Arg(Pbf)‑Pro‑Ala‑NH2的Fmoc保护基，然后与Boc‑Gly‑Pro‑OMe在室温下反应12～24小时，分离纯化，得到Boc‑Gly‑Pro‑Arg(Pbf)‑Pro‑Ala‑NH2，再用三氟乙酸溶液脱保护、盐酸成盐，得到H‑Gly‑Pro‑Arg‑Pro‑Ala‑NH2·HCl，经离子交换后得维洛丝肽。