[发明专利]一种息半夏的组织培养繁殖方法及用途

摘要

本发明涉及一种息半夏的组织培养繁殖方法。利用野生息块茎进行大规模速繁殖息半夏幼苗。以预先培养的无菌息半夏叶片为外植体进行愈伤组织诱导，通过分化、增殖、生根使其再生出植株。本发明的愈伤产生芽和根的分化率可达95％以上，苗移栽成活达90％以上。通过大规模组培繁殖息半夏，使息半夏从野生到人工栽培，可以使息半夏种植面积扩大几十倍，提高了息半夏的产量和一致性，推动息半夏产业迅速的发展。

主权项

一种息半夏的组织培养繁殖方法，其特征在于按如下的步骤进行：(1)从大田直接采集息半夏，经室内种植后，利用新长出的叶片、叶柄作为外植体，消毒过后在接种到培养基上，然后以其叶片、叶柄作为外植体诱导愈伤组织；取息半夏叶片、叶柄，首先用70‑75％(w/w)的酒精浸泡30‑60s，再用0.1％(w/w)的升汞消毒5‑10min，使用无菌水清洗5次，将其切成3‑5mm大小的小块，接种在诱导愈伤培养基上暗培养30天，得到愈伤组织后，移至分化培养基上使其分化，分化的丛芽切成单个芽后使其在增殖培养基上继续生长；在温度为25℃，光照3000Lx，16h/d的光周期条件下培养30天，即可长出息半夏无菌苗；(2)分别以步骤(1)的旱半夏无菌苗的叶片、叶柄为外植体，接入到MS添加6BA、NAA和白糖的培养基中，其中，MS培养基中6BA的浓度为 1.0‑4.0mg/L，NAA的浓度为0.1‑1.0mg/L，白糖的浓度为20‑45mg/L，培养基的 pH值为5.8，琼脂粉为6‑8g/L，在日产高压自动灭菌锅中，温度121℃下灭菌20min，冷却培养基至室温，在24‑26℃，暗培养下，诱导愈伤组织；(3)将步骤(2)中产生的愈伤组织接入MS添加6BA、NAA和白糖的培养基上，其中MS培养基中6BA的浓度为0.5.‑2.0mg/L，NAA的浓度为0.1‑2.0mg/L，白糖糖的浓度为20‑‑45g/L，在24‑26℃，光照3000Lx，光周期16h/d下培养20天，可萌发出不定芽;(4)将步骤(3)中萌发出的丛生芽切成单芽，接入MS 添加6BA和IBA和蔗糖的培养基上，其中MS培养基中的浓度为6BA为0.1‑1.0mg/L，IBA的浓度为0.5‑2.0mg/L，蔗糖的浓度为20‑45g/L，在24‑26℃，光照3000Lx，光周期 16h/d下培养20天，待萌发出大量不定芽时进行生根培养;(5)将步骤(4)中萌发出的息半夏不定芽切出后，在超净台中转入MS添加IBA的培养基中进行生根培养，其中，MS培养基中IBA的浓度为 1.0‑4.0mg/L，在24‑26℃，光照3000Lx，光周期16‑20h/d下培养20天；(6)当步骤(5)中已生根的息半夏组培苗生长至4‑6cm时，根长到2‑3cm时，根数4‑7根左右时将瓶盖拧松半打开进行练苗3‑5天；(7)将步骤(6)中经过练苗的息半夏小苗从培养平中取出，清洗两次，并用多菌灵浸泡30min后，移栽至基质培养土中，其中基质是由菜田土∶珍珠岩按体积比2∶1配制；其中基本培养基和其它组培阶段培养基的各组分与每升所含量为：基本培养基：用MS培养基，附加：白糖20‑45g/L，琼脂粉6g‑8g/L，调节pH5.8‑6.0；愈伤组织诱导培养基：MS+6BA1.0‑4.0mg/L+NAA 0.1‑1.0mg/L；分化培养基：MS+6BA0.5‑2.0mg/L+NAA 0.1‑2.0mg/L；增殖培养基：MS+ 6BA 0.1‑1.0mg/L+IBA 0.5‑2.0mg/L；生根培养基：MS+IBA1‑4mg/L。