[发明专利]一种针对多环芳烃特异性降解的试剂的制备方法在审
申请号: | 201711182041.7 | 申请日: | 2017-11-23 |
公开(公告)号: | CN108042968A | 公开(公告)日: | 2018-05-18 |
发明(设计)人: | 刘梅;李晶晶;陈庆国;康蒙蒙;鲍博;穆军 | 申请(专利权)人: | 浙江海洋大学 |
主分类号: | A62D3/30 | 分类号: | A62D3/30;A62D3/02;A62D101/20 |
代理公司: | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人: | 吴秉中 |
地址: | 316000 浙江省舟*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 本发明公开了一种针对多环芳烃特异性降解的试剂的制备方法,包括:二甲基异咯嗪的合成、二甲基异咯嗪的一次纯化、二甲基异咯嗪的二次纯化、小球藻蛋白液的提取、蛋白液的纯化、试剂的复配,所述试剂以光色素二甲基异咯嗪为探针,以小球藻蛋白酶液为引物复合,添加稳定剂制备而成。有益效果为:以光色素二甲基异咯嗪为多环芳烃检测探针,可高效定位多环芳烃,提高针对多环芳烃特异性降解的效率,同时试剂释放的小球藻蛋白液可有效针对多环芳烃的苯环结构进行断裂,将多环芳烃降解为醛、醇等物质,从而针对性的对其完成降解消除。 | ||
搜索关键词: | 一种 针对 芳烃 特异性 降解 试剂 制备 方法 | ||
【主权项】:
1.一种针对多环芳烃特异性降解的试剂的制备方法,其特征在于:所述制备方法包括:二甲基异咯嗪的合成:将1.0-1.2g6,7二甲基-9-甲酸基甲基异咯嗪固体置于烧杯内,加入硼酸溶液和氢氧化钠溶液,避光搅拌反应90-100分钟得二甲基异咯嗪;二甲基异咯嗪的一次纯化:过滤反应液,将滤液置于分液漏斗中,加入二氯甲烷萃取,反复萃取直至萃取液为无色;在38-40℃温度下用旋转蒸发仪对萃取液旋转蒸发进行浓缩,浓缩液终体积为18-20mL;二甲基异咯嗪的二次纯化:对浓缩液做薄层层析分离、柱层析分离,层析后得到二甲基异咯嗪的溶液;将溶液在70-74℃旋转蒸发,得到浓缩液,再置于真空干燥箱内以55-58℃干燥得到浅黄色二甲基异咯嗪固体;小球藻蛋白液的提取:将小球藻在2-4℃、6000-8000r/min条件下离心浓缩8-10分钟,将浓缩液于超声破碎仪中进行细胞破壁,离心提取取上清即为粗蛋白液;蛋白液的纯化:将蛋白液置于饱和硫酸铵溶液中,经DEAE Sepharose Fast Flow层析柱,用氯化钠缓冲液梯度洗脱,合并具有酶活的洗脱液,在0-4℃温度下,以磷酸缓冲溶液透析过夜,得纯化后的蛋白液;试剂的复配:在蛋白液中加入十二烷基硫酸钠、二甲基异咯嗪粉末,搅拌均匀,静置30-45分钟,加入稳定剂,即得针对多换芳烃特异性降解的试剂。
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