[发明专利]一种三叶青多糖的制备方法及其应用

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及了中草药三叶青多糖的制备及应用。以三叶青藤叶为原料，按照如下步骤依次实施：（1）热水浸提；抽滤收集滤液；真空浓缩；浓缩液加入乙醇；收集沉淀，即三叶青粗多糖。（2）将粗多糖溶于水，加入Sevag试剂；搅拌后离心除蛋白层和有机层，重复此步操作多次至不出现蛋白为止；（3）将除蛋白后的多糖溶于去离子水中，通过DEAE‑52离子交换层析和Sephadex G‑100葡聚糖凝胶层析得到三叶青多糖单一组分。本发明所涉及的三叶青多糖，可显著降低机体血糖血脂，改善机体内抗氧化酶酶活力水平，并对胰岛具有一定修复作用，具有很好的药用价值和市场价值。

主权项

1.一种三叶青多糖在制备降血糖药物上的应用，其特征在于：所述三叶青多糖的制备方法，包括如下步骤依次实施：（1）称取干燥三叶青粉末500g，用2升去离子水80℃提取3小时；抽滤得到滤液，在80℃水浴温度下浓缩至原体积的1/4；加入5倍体积的无水乙醇，沉淀静置过夜；5000转/分离心10分钟收集沉淀，经冷冻干燥后得粗多糖；（2）称取三叶青粗多糖50克，溶解1500毫升去离子水中，加入300毫升Sevag试剂；充分搅拌1~2小时，3500转/分离心20分钟，去除蛋白层和有机层；水层反复重复除蛋白步骤到不出现蛋白层为止；所得水溶液用去离子水透析72小时，冷冻干燥得脱蛋白三叶青多糖；（3）将5克脱蛋白多糖溶解于50毫升去离子水中，用2.6×30cmDEAE‑纤维素离子交换柱分离；依次用500毫升水、0.1M‑0.3M氯化钠溶液洗脱，洗脱速度8毫升/分钟，每 20 毫升洗脱液收集一管，经由苯酚硫酸法检测，收集0.3M氯化钠洗脱下来的组分，用去离子水透析72小时后，冷冻干燥得到三叶青多糖组分。