[发明专利]一种PM2.5颗粒对人肺细胞内自由基代谢通路影响的评估方法在审
| 申请号： | 201711202505.6 | 申请日： | 2017-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN109839498A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 宋肖垚;陈吉平;耿柠波;张海军;张亦弛 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | G01N33/50 | 分类号： | G01N33/50;G01N33/53 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种PM2.5全化学组分颗粒对细胞内自由基代谢影响的评估方法。通过PM2.5全化学组分颗粒对人肺‑支气管上皮细胞的暴露，利用液相色谱质谱(LC‑MS)对细胞内小分子代谢产物进行能有效分析，结合生物学检测方法对酶活性进行快速分析，整合与胞内自由基代谢相关的小分子代谢产物的变化以及能量代谢中起关键作用的限速酶的活性变化，综上，基于分子生物学构建了一套评估细胞受外源性污染毒作用暴露后细胞内氧自由基代谢干扰的新方法。该方法能直观的分析污染物对细胞内自由基代谢路径的影响，同时本发明具有前处理方法简单，检测快速，重复性好，获得信息量全面等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 自由基代谢 细胞 小分子代谢产物 组分颗粒 全化学 评估 支气管上皮细胞 液相色谱质谱 分子生物学 生物学检测 外源性污染 代谢干扰 关键作用 活性变化 快速分析 能量代谢 人肺细胞 氧自由基 有效分析 酶活性 前处理 限速酶 暴露 构建 人肺 整合 信息量 污染物 直观 检测 分析 | ||
【主权项】：
1.一种PM2.5全化学组分颗粒对人肺细胞内自由基代谢通路影响的评估方法，其特征在于以下步骤：(a)原代培养人肺上皮细胞接种于六孔板，接种密度为1×105个/mL六孔板内每孔加入培养液体积为3mL；在培养箱培养24‑48h(37℃，5％CO2)，待细胞进入对数生长期覆盖培养板80％后；用PM2.5全化学组分颗粒对人肺细胞进行暴露，即移弃原培养液，每孔加入PM2.5全化学组分颗粒的培养液3mL，以保证细胞生长营养需求，在原条件下培养24小时后收取细胞；(b)步骤a所得细胞样品提取细胞内小分子代谢产物；利用基于LC‑MS的质谱方法对小分子代谢产物进行定量分析；(c)步骤a所得细胞样品，经超声破碎制得悬液，测定与能量代谢相关酶的活性；所述加入含PM2.5全化学组分颗粒的培养液为1～4mL，优选3mL，浓度为10μg/mL‑250μg/mL。
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