[发明专利]一种利用响应面法优化油橄榄叶总黄酮的提取方法

摘要

本发明公开了一种利用响应面法优化油橄榄叶总黄酮的提取方法，包括以下步骤(1)样品溶液制备准确称取油橄榄叶粉末，加甲醇水浴热浸提，3000‑5000转离心8‑15min，收集上清液后定容；(2)用AlCl3显色法测定并计算总黄酮含量；(3)实验设计和统计分析A、单因素试验和B、响应面优化试验方法以油橄榄叶总黄酮含量为响应值，甲醇浓度、料液比、提取温度和提取时间为自变量，设计4因素3水平响应面试验，建立多元二次回归方程；(4)数据处理对实验数据进行统计分析处理。与已有提取技术相比，本发明工艺稳定，方法简单，操作容易，能耗低，提取时间短，提取率高，具有较好的经济效益和社会效益。

主权项

一种利用响应面法优化油橄榄叶总黄酮的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品溶液制备：准确称取油橄榄叶粉末，加甲醇水浴热浸提，3000‑5000转离心8‑15min，收集上清液后定容；(2)用AlCl3显色法测定并计算总黄酮含量；所述的AlCl3显色法，包括以下步骤：取待测液2mL，加4mL AlCl3(1％)试剂，30％甲醇定容至25mL，摇匀避光，静置10min，于415nm检测吸光值；以芦丁标准液浓度为x轴、吸光度为y轴，绘制标准曲线；所得回归方程为y＝0.0359x‑0.0012，R2＝0.9993；总黄酮含量(％)＝样品液中总黄酮质量浓度×样品液体积×稀释倍数/初始油橄榄叶质量/1000×100；(3)实验设计和统计分析；A、单因素试验；以油橄榄叶总黄酮含量为指标，考察甲醇浓度(60、70、80、90、100％，固定料液比1:40，时间180min，温度70℃)、提取时间(60、120、180、240、300min，固定料液比1:40，甲醇浓度70％，温度70℃)、提取温度(60、70、80、90、100℃，固定料液比1:40，时间180min，甲醇浓度70％)、料液比(1:10、1:20、1:30、1:40，固定甲醇浓度70％，时间180min，温度70℃)4个因素对总黄酮含量的影响；B、响应面优化试验方法；在单因素试验结果的基础上，采用Design‑Expert 8.0(RSM)软件设计试验条件，选用Box‑Behnken(BB)模型，以油橄榄叶总黄酮含量为响应值y，甲醇浓度(A)、料液比(B)、提取温度(C)、提取时间(D)为自变量，设计4因素3水平响应面试验，建立多元二次回归方程：Y＝3.10+0.34A+0.070B+0.063C‑0.095D+0.035AB+0.018AC+0.19AD‑0.050BC+0.095BD+0.25CD‑0.58A2‑0.35B2‑0.46C2‑0.31D2；(4)数据处理采用Microsoft Excel 2010、SPSS 17.0对实验数据进行统计分析处理；所有试验均重复三次。