[发明专利]一种人EGFR基因四重多位点突变检测试剂盒及方法

摘要

本发明一种人EGFR基因四重多位点突变检测试剂盒及方法是基于三荧光通道数字PCR方法设计的精准检测人EGFR基因突变位点的试剂盒。本试剂盒及方法利用特异的TAQMAN探针，针对EGFR基因L858R、L861Q、E19缺失和T790M四重突变区域，在单管反应液中同时检测涉及EGFR‑TKI药敏和耐药的共22个突变位点，并且可以根据突变DNA的拷贝数判定模板类型。针对人EGFR基因19号外显子缺失突变，本试剂盒及方法还包括一种特异修饰的阻遏核苷酸探针，其可以与野生型DNA结合，从而确保检测到的荧光微珠均为突变DNA的信号，之后再根据突变DNA的拷贝数判定模板的类型。本发明中涉及到的试剂盒及方法克服了以往EGFR基因突变检测中繁琐和灵敏度低等问题，大大提高了人EGFR基因突变检测的稳定性、特异性和灵敏度。

主权项

1.一种人EGFR基因四重多位点突变检测试剂盒，其特征在于，所述人EGFR基因四重多位点突变检测试剂盒由以下组分组成：（1）包括引物和探针混合液：所述探针包括检测探针1‑4和封闭探针，所述引物及探针的核苷酸序列如SEQ ID No：1至SEQ ID No：11所示；（2）数字PCR反应液的预混液；（3）数字PCR芯片；（4）数字PCR校准文件，所述检测探针1和检测探针2的5’端的荧光报告基团是FAM，所述检测探针3的5’端的荧光报告基团是Cy5，所述检测探针4的5’端的荧光报告基团是VIC，所述检测探针1和检测探针2的3’端的淬灭荧光基团是BHQ1或MGB，所述检测探针3的3’端的淬灭荧光基团是BHQ3或MGB，所述检测探针4的3’端的淬灭荧光基团是BHQ1或 BHQ2或MGB。