[发明专利]一种快速检测土霉素孔板发酵液效价的方法

摘要

本发明属于土霉素检测技术领域，具体涉及一种快速检测土霉素孔板发酵液效价的方法。由以下步骤制备而成：制作标准曲线，求得x、y的函数关系式，要求相关系数r>0.999；取土霉素斜面孢子制成单孢子悬液置于深孔板内进行发酵得到土霉素发酵液，将酸化后的土霉素发酵液进行离心，吸取离心后土霉素发酵液的上清液置于96孔酶标板中，加入超纯水稀释100~200倍，然后用酶标仪于290‑292nm下检测吸光值，将检测的吸光值x带入函数关系式中计算得浓度值y，使用浓度值计算得土霉素孔板发酵液效价，本发明检测方法高效，准确。

主权项

1.一种快速检测土霉素孔板发酵液效价的方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：（1）称取土霉素标准品，用0.01mol/L的盐酸溶解配成1000u/ml的母液，然后再用超纯水将配成的土霉素标准品母液分别稀释成5u/ml、10u/ml、15u/ml、20u/ml、25u/ml、30u/ml、35u/ml、40u/ml；（2）分别吸取200μl步骤（1）中各个浓度的土霉素标品至酶标板中，以超纯水为对照，用酶标仪于290-292nm波长下检测各浓度土霉素标准品溶液的吸收值，以浓度y为纵坐标、吸收值x为横坐标作图，求得x、y的函数关系式，要求相关系数r>0.999；（3）取土霉素斜面孢子制成单孢子悬液置于深孔板内进行发酵得到土霉素发酵液，每个孔中土霉素斜面孢子制成单孢子悬液体积相同；（4）向每个孔中的土霉素发酵液加入等体积等浓度的草酸震荡混匀，得到酸化的土霉素发酵液，将酸化后的土霉素发酵液进行离心；（5）吸取离心后土霉素发酵液的上清液置于96孔酶标板中，所述的每个孔中土霉素发酵液的上清液体积相同，加入超纯水稀释100~200倍，混合均匀后，然后用酶标仪于290-292nm下检测吸光值；（6）将步骤（5）中检测的吸光值x带入函数关系式中计算得浓度值y，使用浓度值计算得土霉素孔板发酵液效价，计算公式如下：浓度值×稀释倍数=孔板发酵液效价。