[发明专利]一种沙棘属植物根瘤内生菌分离培养方法

摘要

本发明公开了一种沙棘属植物根瘤内生菌分离培养方法，是对沙棘根瘤样品进行表面消毒后，采用根瘤切片法和平板分离法，在不同的培养基上分别加入沙棘根浸出液，进行不同种类沙棘根瘤内生菌的分离培养。研究表明，在沙棘根瘤内生细菌分离时，培养基中加入沙棘根浸出液后的培养基营养更加丰富，更适合内生菌的生长。在分离内生菌的过程中，根瘤切片周围很快铺满生长较快的细菌菌苔，阻碍了生长较慢的细菌和放线菌，尤其是弗兰克氏菌的生长；并且在后期菌株的扩大培养中，加入沙棘根浸出液的培养基也能显著促进菌株的生长，显著增加了可培养根瘤内生菌菌株的种类和数量，获得更多的内生菌资源，并且可以缩短内生菌分离培养的时间。

主权项

一种沙棘属植物根瘤内生菌分离培养方法，包括以下工艺步骤：（1）对沙棘根瘤样品进行表面消毒：取备用的沙棘根瘤样品，依次用流动的自来水冲洗，并用毛笔刷洗掉泥沙等杂质后，用无菌水冲洗3~5次，用75%乙醇表面消毒8~10min、用1%NaClO溶液表面消毒5~7min，再用无菌水冲洗3~5次；（2）内生菌培养：将经消毒处理的沙棘根瘤切片，分别置于不同的平板培养基上，采用不同的培养基并分别加入沙棘根浸出液，进行无菌培养；培养条件为：于25~30℃下培养 3~7d；内生真菌采用PDA培养基，内生细菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，内生放线菌采用高氏I号培养基；（3）内生菌的分离纯化：待组织块边缘长出菌落后转接至新鲜的平板，通过划线纯化，然后在显微镜下观察并检测其纯度，直到获得内生菌单菌落，斜面保存备用。