[发明专利]一种微量精子冷冻保存方法

摘要

本发明公开了一种微量精子冷冻保存方法，旨在提供一种体积较小的、具有封闭空间、易于操作、精子活性高的微量精子(含单个精子，如睾丸穿刺精子、附睾穿刺精子、严重少精和弱精症患者的精子等)的冷冻保存载体和冷冻保存方法，精子复苏时，自液氮罐中取出冷冻管，用吸管将冷冻保存载体从冷冻管内取出，迅速加入到精子培养皿中(37℃)，倒置显微镜下(100‑200倍放大倍数)在冷冻载体内仔细寻找精子，用卵泡内单精子注射针抓取精子转入精子培养皿的精子培养基中，用于后续精子制动和成熟卵子的ICSI。

主权项

1.一种微量精子冷冻保存方法，其特征在于，依次包括如下步骤：(1)精子冷冻保存载体制备①配制高分子溶液，采用微球制备技术制备水凝胶微球，去离子水清洗水凝胶微球去除溶剂和未反应的原料；②将清洗干净的微球加入到成膜反应溶液中，搅拌反应于微球外表面形成微球外壳，去离子水清洗水凝胶微球去除溶剂和未反应的原料，获得水凝胶微球载体；③将微球载体加入到液化反应溶液中，搅拌反应液化微球载体内部的水凝胶微球，形成膜包裹的中空结构，去离子水清洗水凝胶微球去除溶剂和未反应的原料，获得得中空微球载体；(2)精子冷冻保存冷冻时，先吸取精子置于精子培养皿中，然后吸取中空微球载体置于精子培养皿中，用卵泡内单精子注射针抓取一定数量的活动精子置入冷冻保存的载体内部，用吸管吸取冷冻保存载体放入冷冻管中，冷冻管内添加精子冻存液，冷冻管置于液氮液面上方一定高度，进行液氮蒸汽预冷降温，将冷冻管投入液氮中进行快速冷冻，并于其中保存。