[发明专利]一种叶酸修饰的果胶纳米粒子的双靶向递送方法

摘要

本发明公开了一种叶酸修饰的果胶纳米粒子的双靶向递送方法。所述的果胶纳米粒子是由果胶与八臂聚乙二醇共轭结合，果胶与叶酸通过酰胺键连接，八臂聚乙二醇与抗癌药物熊果酸通过酯键结合，得到叶酸‑(果胶‑多臂聚乙二醇)‑熊果酸前药，与抗癌药物羟基喜树碱以一定比例混合，通过自组装的方法制备核壳结构的双靶向纳米粒子。该方法制备的双靶向果胶纳米粒子生物相容性好，果胶可被结肠处的果胶酶降解，八臂聚乙二醇易为无毒载体，药物在体内运输过程无突释现象，体外释放实验显示出很好的pH值响应性。本文制备的纳米药物载药率高，包埋率可控，产率高，作为一种新型的药物载体，果胶具有很好的临床应用前景。

主权项

一种叶酸修饰的果胶纳米粒子的双靶向递送方法，其特征在于：所述的果胶纳米粒子是由果胶与八臂聚乙二醇共轭结合，果胶与叶酸通过酰胺键连接，八臂聚乙二醇与抗癌药物熊果酸通过酯键结合，得到叶酸‑(果胶‑多臂聚乙二醇)‑熊果酸前药，与抗癌药物羟基喜树碱以一定比例混合，通过自组装的方法制备核壳结构的双靶向纳米粒子。具体步骤如下：(1)将适量叶酸溶于二甲基亚砜中，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)激活叶酸的末端羧基，反应30分钟后加入乙二胺和吡啶，搅拌均匀，避光反应24小时，得到氨基化叶酸(FA‑NH2)，将反应液转移到透析膜内，磷酸缓冲溶液(pH＝7.4)作为透析外液，透析过夜，每4小时更换一次透析外液，收集透析膜内溶液，冷冻干燥，得到黄色粉末；(2)取适量果胶溶于去离子水，搅拌均匀，加入EDC反应30分钟，激活果胶的羧基，再加入FA‑NH2和4‑二甲氨基吡啶(DMAP)，避光反应24h，将反应液转移到透析膜内，磷酸缓冲溶液(pH＝7.4)作为透析外液，透析过夜，每4小时更换一次透析外液，收集透析膜内溶液，冷冻干燥，得到叶酸‑果胶(FA‑Pectin)黄色粉末；(3)取适量八臂聚乙二醇溶于吡啶中，搅拌均匀，加入EDC反应30分钟，激活聚乙二醇的羧基，再加入抗癌药物熊果酸(UA)和催化剂DMAP，连续通氮气，35℃下反应48小时，取出混合液，加入三倍乙醚(v/v，相对于混合液体积)，搅拌均匀，有白色沉淀析出，4000转离心收集沉淀，并用乙醚多次洗涤离心，得到八臂聚乙二醇‑熊果酸耦合物粗品，将其转移到透析膜内，磷酸缓冲溶液(pH＝7.4)作为透析外液，透析过夜，每4小时更换一次透析外液，收集透析膜内溶液，冷冻干燥，得到八臂聚乙二醇‑熊果酸耦合物(8armPEG‑UA)白色粉末；(4)取八臂聚乙二醇‑熊果酸耦合物，EDC溶解在二甲基亚砜中，反应30分钟，加入叶酸‑果胶和DMAP，连续通氮气，35℃避光反应48小时，取出混合液，加入三倍乙醚(v/v，相对于混合液体积)搅拌均匀，有黄色沉淀析出，4000转离心收集沉淀，并用乙醚多次洗涤离心，得到叶酸‑果胶‑八臂聚乙二醇‑熊果酸(FA‑Pectin‑8armPEG‑UA)粗品，将其转移到透析膜内，磷酸缓冲溶液(pH＝7.4)作为透析外液，透析过夜，每4小时更换一次透析外液，收集透析膜内溶液，冷冻干燥，得到纯化的叶酸‑果胶‑八臂聚乙二醇‑熊果酸黄色粉末；(5)二甲基亚砜溶解叶酸‑果胶‑八臂聚乙二醇‑熊果酸耦合物，移液枪析出，逐滴滴入磷酸缓冲溶液中(PBS，pH＝7.4)，搅拌一段时间，得到叶酸‑果胶‑八臂聚乙二醇‑熊果酸纳米粒子溶液，透析，每隔6小时更换透析外液，过夜，收集透析膜内液体，冷冻干燥，得到叶酸‑果胶‑八臂聚乙二醇‑熊果酸纳米粒子黄色粉末；(6)取适量叶酸‑果胶‑八臂聚乙二醇‑熊果酸耦合物和疏水药物羟基喜树碱溶于二甲基亚砜，搅拌均匀，逐滴滴入磷酸缓冲溶液中(PBS，pH＝7.4)，搅拌一段时间，得到叶酸‑果胶‑八臂聚乙二醇‑熊果酸/羟基喜树碱(FA‑Pectin‑8armPEG‑UA/HCPT)纳米粒子溶液，透析，每隔6小时更换透析外液，过夜，收集透析膜内液体，冷冻干燥，得到叶酸‑果胶‑八臂聚乙二醇‑熊果酸/羟基喜树碱纳米粒子黄色粉末。