[发明专利]一种肌腱修复材料的制备方法

摘要

本发明涉及组织器官再生与修复领域，尤其涉及一种肌腱修复材料的制备方法，为肌腱缺损修复提供了一条新的途径。本发明所述的肌腱修复材料由动物源脱细胞跟腱材料与特定肌腱种子细胞结合后制备而得，跟腱材料在消除了异种组织的免疫原性的同时有选择的保留了有助于肌腱再生的各种期望有益组分，而种子细胞为外源性生长因子在体外可控诱导的受体自身肌腱细胞，二者的结合有效发挥了组织工程化肌腱的再生作用，临床适用性强，优先但不限应用于肌腱修复。

主权项

一种肌腱修复材料的制备方法，具体步骤如下：（1）制备脱细胞跟腱：无菌条件下取新鲜的动物跟腱，用手术剪除去跟腱上的脂肪碎片和其他杂质，用PBS缓冲液漂洗血迹等污垢，再用过氧乙酸溶液进行浸泡消毒处理，将处理后的跟腱组织进行冷冻后，再用匀浆机将其粉粹，依次用含胰蛋白酶、EDTA、TBP、核酸酶的PBS缓冲溶液对粉碎后的跟腱材料进行萃取，脱除细胞成分，调节pH至人体体液pH值，并采用PBS缓冲液清洗，经上述处理后的跟腱材料置于PBS缓冲液中进行4℃保存；（2）制备肌腱种子细胞：无菌条件下收集患者自身在清创手术中被清除的残碎肌腱组织，剥离外膜后用Hanks液漂洗血迹等污垢，再用过氧乙酸溶液进行浸泡消毒处理，用手术剪将其剪碎成5‑6mm3大小的组织块，用胰蛋白酶及胶原酶37℃消化处理，过滤后离心，将组织块均匀悬置于含血小板血浆的DMEM/F12培养液中进行低氧培养，定期更换培养液，当融合成单层细胞后进行传代，将原代细胞消化后置换新的培养液，待80%细胞融合后进行细胞计数，以1×106/ml的细胞浓度接种于培养瓶中进行低氧传代培养；（3）体外构建组织工程肌腱修复材料：将步骤（1）制备的去细胞异种跟腱材料充分浸入到步骤（2）培养扩增的自体肌腱细胞悬液中，置于37℃培养箱中进行低氧培养、融合，然后在含有外源性生长因子的诱导液中进行诱导培养，定期更换一次复合诱导液，经过数天完成诱导过程，即为可用于移植修复肌腱损伤的肌腱修复材料。