[发明专利]基于金属有机框架材料作为信号探针的核酸适配体电化学传感器

摘要

本发明涉及一种基于金属有机框架材料(MOFs)作为信号探针的核酸适配体电化学传感器，将其用于β‑淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体的检测，属于功能纳米复合材料和生物传感器检测技术领域。本方法利用金纳米花(AuNFs)修饰的玻碳电极固定第一层核酸适配体，进一步识别Aβ寡聚体后结合第二层核酸适配体修饰的负载金纳米粒子的Cu‑MOFs(AuNPs/Cu‑MOFs)，从而形成夹心型电化学传感器用于检测Aβ寡聚体。AuNPs/Cu‑MOFs作为氧化还原介质可以直接检测Cu²⁺信号，不需要另外标记电化学活性分子，大大简化了检测步骤，提高测定的灵敏度。

主权项

1.一种基于金属有机框架材料作为信号探针的β‑淀粉样蛋白寡聚体的核酸适配体电化学传感器，其特征在于，通过如下方法制备而成：(1)金纳米粒子/Cu‑MOFs复合物AuNPs/Cu‑MOFs的制备：将均苯三甲酸在超声条件下溶解于甲醇中，并将CuSO₄·3H₂O溶解于H₂O中，然后将CuSO₄·3H₂O溶液逐滴滴入上述均苯三甲酸溶液中，在室温下静置反应；反应结束后利用离心的方法将沉淀物反复洗涤，真空干燥过夜得到Cu‑MOFs；将Cu‑MOFs粉末加入到AuNPs溶液中在室温下连续搅拌反应，反应结束后，将沉淀反复洗涤，真空干燥得AuNPs/Cu‑MOFs粉末；(2)核酸适配体在AuNPs/Cu‑MOFs上的固定：将AuNPs/Cu‑MOFs粉末分散在磷酸盐缓冲溶液中，将硫醇化的核酸适配体粉末溶解于上述AuNPs/Cu‑MOFs溶液中，并在室温下孵育过夜得到核酸适配体溶液；(3)夹心型核酸适配体传感器的构筑：将玻碳电极打磨抛光，清洗，将电极表面吹干，将其放入HAuCl₄水溶液中在恒电位下电沉积，得到金纳米花AuNFs修饰的玻碳电极；将AuNFs修饰的玻碳电极浸泡于硫醇化的核酸适配体溶液中室温孵育过夜；随后，用1‑己硫醇溶液封闭电极表面，消除AuNFs的非特异性结合位点；然后将上述电极浸入不同浓度的Aβ寡聚体溶液中，在恒温水浴下使适配体与Aβ寡聚体进行特异性结合；再将电极浸泡于步骤(2)制得的核酸适配体修饰的AuNPs/Cu‑MOFs溶液中进行孵育，使第二层核酸适配体与Aβ寡聚体进行特异性结合；用缓冲溶液洗涤后，制得夹心型核酸适配体电化学传感器；所述硫醇化的核酸适配体的DNA序列为5′‑HS‑GCCTGTGGTGTTGGGGCGGGTGCG‑3’。