[发明专利]一种治疗跌打损伤的中药组合物的检测方法

摘要

本发明涉及一种治疗跌打损伤的中药组合物的检测方法，属于中药、天然药物技术领域。在当归、冰片、栀子、三七和醋延胡索的薄层色谱鉴别和乌头碱限量检查的的基础上，乳香与菊花的薄层鉴别，采用高效液相色谱技术，对其君药三七含量测定方法进行了改进；同时新建了毒性药材朱砂的含量测定方法。本发明解决了该组合物由于控制方法偏低导致的片面使用单一提取物取代贵重药材的造假现象，同时提高了临床安全性及有效性，该方法不仅适用于工业化生产对该类组合物的全面质量控制，也为临床用药提供了安全有效保障。

主权项

一种治疗跌打损伤的中药组合物的检测方法，所述中药组合物是由下列步骤得到的：朱砂12.1份水飞成极细粉；冰片24.2份研磨成细粉；三七121.2份、制川乌12.12份、当归20.2份、醋乳香20.2份、醋没药20.2份、石菖蒲8.1份粉碎成细粉，与朱砂粉末配研，过筛，混匀；其余栀子40.4份、制草乌12.12份、烫骨碎补40.4份、蒲公英60.6份、小蓟6.7份、仙鹤草60.6份、红花40.4份、菊花40.4份、莲子心12.12份、重楼13.5份、醋延胡索20.2等十一味药材加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成70～75℃时测相对密度为1.23～1.25稠膏，与上述除冰片外的粉末混合，干燥，粉碎，混匀，加入冰片细粉，混匀；检测方法包括：当归、冰片、栀子、三七和醋延胡索的薄层色谱鉴别和乌头碱限量的检查方法，其特征在于还包括：(1)醋乳香的薄层鉴别，具体步骤如下：(a)供试品溶液的制备：取本品2.5g，混匀，加乙醇20～40ml，超声处理20～30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇1ml，作为供试品溶液；(b)对照药材溶液的制备：取乳香对照药材0.2g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；(c)阴性样品溶液的制备：取醋缺乳香的处方药材，按处方比例及制备方法按供试品溶液制备方法制成阴性对照液；(d)色谱条件与操作：照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以60℃～90℃石油醚：环已烷：乙酸乙酯：甲酸＝10:30:15:1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；(e)结果特征：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；经方法学验证其阴性样品无干扰，说明该方法具备专属性的特征；(2)、菊花薄层鉴别，具体步骤如下：(a)供试品溶液的制备：取本品6g，研细，加三氯甲烷30～50ml，加热回流30分钟，滤过，弃去滤液，药渣挥干溶剂，加水80～100ml，加热回流40～60分钟，离心，取上清液，加盐酸0.5～1.0ml，用乙酸乙酯振摇提取二次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶液，做为供试品溶液；(b)对照药材溶液的制备：另取菊花对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；(c)阴性样品溶液的制备：取缺菊花的处方药材，按处方比例及制备工艺按供试品溶液制备方法制成阴性对照液；(d)色谱条件与操作：照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条状，以乙酸丁酯：冰醋酸：水＝:2.5:(2.5～3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；(e)结果特征：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光条斑；经方法学验证其阴性样品无干扰，说明该方法具备专属性的特征。(3)三七的含量测定方法，步骤如下：(a)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为203nm，理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000；(b)对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg1 0.4mg、人参皂苷Rb10.4mg、三七皂苷R10.1mg的混合溶液，即得；(c)供试品溶液的制备取本品，研细，取0.7g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚100ml，低温加热回流提取3小时，弃去乙醚液，药渣挥干溶剂，再加甲醇100ml，继续回流提取4小时，放冷，收集提取液，用甲醇10ml分次洗涤容器及药渣，洗液与提取液合并，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(d)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，含人参皂苷Rg1C42H72O14、人参皂苷Rb1C54H92O23、三七皂苷R1C47H80O18的总量不得少于4.8mg；(4)朱砂含量测定，采用沉淀滴定法测定，步骤如下：取本品，研细，取5g，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸20～40ml与硝酸钾7～9g，加热至近无色，放冷，转入250ml锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加1％高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消失，再滴加2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用0.1mol/L硫氰酸铵滴定液滴定，每1ml硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg的硫化汞HgS，本品每粒含朱砂以硫化汞HgS计，为9.5～13.5mg。