[发明专利]一种高通量的光电化学酪氨酸酶传感器

摘要

酪氨酸酶催化氧化酚类化合物产生的醌类化合物可以通过醌氨反应共价键合到沉积了壳聚糖的PbS量子点修饰的光电极表面，这些醌类化合物作为电子受体大大抑制了PbS量子点的光生电子‑空穴的复合，从而使阴极光电流大大提高。利用这一原理构建了针对酪氨酸酶活性检测的光电化学酶传感器。此传感器不仅具备光电阴极的高选择性，同时，也具有无需将酶固定、高通量、高灵敏的优势。为阴极光电化学酶传感器的研制提供了新策略。

主权项

1.一种高通量的光电化学酪氨酸酶测定方法，其特征在于：a、以巯基乙酸作为表面修饰剂制备水溶性PbS量子点，具体步骤为：将一定体积的巯基乙酸和25mL4.0mmol/L的Pb(CH₃COO)₂溶液搅拌混合后，用1mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH为8.0；然后将反应溶液除氧30min，之后加入2.0mL浓度为0.02mol/L的Na₂S水溶液，在一定温度下除氧反应一段时间，得水溶性PbS量子点；b、将PbS量子点与壳聚糖依次修饰到电极表面：将预处理的ITO玻璃片浸在含有NaCl的2％PDDA聚合物的溶液中，10min后洗净；然后再浸入到水溶性PbS量子点溶液中，30分钟后取出洗净；用pH＝4.0的醋酸缓冲配制2wt％质量浓度的壳聚糖溶液，之后用pH＝7.0的醋酸缓冲液稀释成0.5wt％的浓度；吸取20μL稀释后的壳聚糖溶液滴加到PbS量子点电极上，在室温下干燥，备用；c、酪氨酸酶活性的测定：在96微孔板中，将20μL不同浓度的酪氨酸酶、20μL1mmol/L的酪氨酸酶底物和160μL浓度为0.1mol/L的pH＝7.0磷酸盐缓冲溶液混合，37℃下震荡反应90min；随后，将制备好的沉积了PbS以及壳聚糖的光电极浸没在上述反应后的溶液中，10min后取出洗涤，将电极放在盛有除氧后的0.1mol/L的pH＝7.0Tris‑HCl缓冲溶液中进行光电化学检测。